mirna对共刺激分子cd80、cd86及其受体在消化道肿瘤中表达的调控作用及临床意义

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1、硕士学位论文论文题目miRNA对共刺激分子CD80、CD86及其受体在消化道肿瘤中表达的调控作用及临床意义研究生姓名朱健洁指导教师姓名张学光教授汪维鹏副教授专业名称免疫学研究方向肿瘤免疫论文提交日期2013年5月miRNA对共刺激分子CD80、CD86及其受体在消化道肿瘤中表达的调控作用及临床意义中文摘要中文摘要前言活化的T淋巴细胞在机体的抗肿瘤、抗感染和自身免疫疾病中发挥重要作用。T细胞的活化不仅需要T细胞受体（TCR）与抗原肽-MHC复合物作用产生的第一信号，还需要表达于抗原提呈细胞（APC）表面的B7家族协同刺激分子与T细胞上的相应受体结合产生的第二信号。协同刺激分子与其受体结合产生

2、正性或负性信号。协同刺激分子CD80和CD86与其受体CD28结合产生正性信号，或与其受体CTLA-4结合提供负性信号，调节T细胞活性，进而调控机体的免疫反应。协同刺激分子CD80和CD86表达在APC细胞上，而在多数的肿瘤组织及细胞中低表达或不表达，从而不能有效的诱导T细胞的活化，引起肿瘤细胞免疫逃逸而促进肿瘤的发生和发展。通过结直肠癌小鼠模型发现，肿瘤细胞低表达CD80分子的是其逃避免疫监视的机制，并且这与低表达CD80分子的未成熟的DC细胞的作用机制相似。microRNA（miRNA）是一类长约22个核苷酸的内源性非编码小分子RNA，通过与靶mRNA的3'-UTR互补结合，在转录后水

3、平调控基因翻译，在基因表达中发挥着重要的作用。目前多数的研究发现肿瘤中异常表达的miRNA可以调节细胞的分化、增殖以及凋亡从而影响肿瘤微环境。第一部分人结直肠癌中异常表达的miRNA对CD80、CD86及其受体分子表达的调控作用【目的】探讨在结直肠癌中异常表达的miRNA对CD80、CD86及其受体分子表达的调控作用。【方法】首先采用实时荧光定量PCR法测定6例结直肠癌中CD80、CD86的表达量，并对其进行分析。然后，采用miRNA芯片技术测定6例结直肠癌组织及I中文摘要miRNA对共刺激分子CD80、CD86及其受体在消化道肿瘤中表达的调控作用及临床意义癌旁组织中miRNA的表达量，统

4、计分析癌组织中异常表达的miRNA。在这些miRNA中，使用生物信息学软件预测可能与CD80、CD86及受体CD28、CTLA-4基因3‟-UTR作用的miRNA；并用实时荧光定量PCR的方法进一步验证预测有作用的miRNA在结直肠癌组织中的表达。最后，采用双荧光素酶报告基因系统分析这些miRNA对CD80、CD86及受体CD28、CTLA-4基因表达的调控作用。【结果】（1）实时荧光定量PCR结果显示CD80、CD86的mRNA水平在结直肠癌及癌旁的表达量没有明显差异。（2）结直肠癌组织中有30条miRNA表达明显高于癌旁组织，有8条miRNA的表达明显低于癌旁组织；其中上调的miR-2

5、1、miR-34a可能与CD80基因3‟-UTR结合，miR-21、miR-31、miR-34a和miR-181b可能与CD86基因3‟-UTR结合，miR-31、miR-34a、miR-181b、miR-20b和miR-142-3p可能与CD28基因3‟-UTR结合；表达下调的miR-140-3p、miR-143、miR-145和miR-378可能与CTLA-4基因3‟-UTR结合。（3）构建了含CD80、CD86与受体CD28、CTLA-4基因3‟-UTR的荧光素酶重组载体，通过酶切和基因测序的方法验证正确。双荧光素酶报告基因系统分析结果发现，上调表达的miR-21、miR-31、mi

6、R-20b和miR-142-3p可以分别与CD80、CD86和CD28基因3‟-UTR结合，而下调表达的miR-378和miR-145可以与CTLA-4基因3‟-UTR结合，抑制其表达。【结论】结直肠癌组织中，miR-21、miR-31、miR-20b和miR-142-3p等miRNA表达上调，抑制了CD80、CD86和CD28的蛋白表达；而下调表达的miR-378和miR-145可以抑制CTLA-4的蛋白表达，从而介导了肿瘤免疫逃逸。这为研究肿瘤细胞免疫逃逸和寻找到新的抗肿瘤靶标奠定了基础。第二部分CD80基因3‟-UTR内的单核苷酸多态性与胃癌发生的相关性研究【目的】研究CD80基因3

7、‟-UTR内的单核苷酸多态性（SNP）与胃癌发生的相关性。【方法】收集了183例胃癌患者以及348例正常人的外周血样本。首先，运IImiRNA对共刺激分子CD80、CD86及其受体在消化道肿瘤中表达的调控作用及临床意义中文摘要用生物信息学方法筛选出位于CD80基因3‟-UTR的SNP位点；然后预测CD80基因3‟-UTR内可能存在的miRNA结合位点；最后，筛选出位于预测的miRNA结合位点内的，且较小等位基因频率(MA