盐芥和拟南芥硫氧还蛋白在氧化胁迫中的功能研究

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1、山东师范大学硕士学位论文盐芥和拟南芥硫氧还蛋白在氧化胁迫中的功能研究姓名：王秋霞申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：王增兰20080420独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得——或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。(注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空)与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献摹位论文作

2、者签名：王走火‘谖导师签字：学位论文版权使用授权书l}焉童轰J矿c7l弋)‘本学位论文作者完全了解堂撞有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权堂撞可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：王献荫导师签字：Jf多签字日期：加富年仁月趵日签字日期：沙辉尹月如日山东师范大学硕士学位论文中文摘要植物在生活史中不可避免的

3、要遭受盐、干旱、低温等胁迫，在初期阶段会造成植物体离子失衡和渗透紊乱，胁迫的延续或加重常会伴随ROS的产生和次生性氧化胁迫的发生，最终导致植物生长缓慢，产量降低。生物体可通过多种调节方式和调节途径对生物体的氧化还原状态进行调节，与硫氧还蛋白相关的氧化还原调节是这些调节方式中的一种。硫氧还蛋白(砸oredoxin，删是一类低分子量、热稳定、酸性蛋白，广泛存于原核生物和真核生物(包括动物、植物、细菌和古细菌等)中，其分子量约12妨a；蛋白质分子中含有保守的WCG(P)PC活性序列位点，该序列中的两个半胱氨酸

4、残基可构成具有氧化还原活性的二硫桥，通过巯基／二硫键的转换实现其氧化还原状态的变化和电子／氢的传递，参与生物体的氧化还原调节。植物体中的TⅨ最初是在叶绿体中发现的，被认为是光合作用中一些关键酶的活化调节蛋白，后来在细胞质和线粒体中也发现了硫氧还蛋白，它们在结构和功能上都有所差异．自发现硫氧还蛋白以来的几十年里，人们对它的种类、特点、功能等方面有了越来越多的认识，为更好地利用它奠定了必要的基础。盐芥是一种与拟南芥近缘的十字花科植物，具有很多与拟南芥相同的优点：如类似的形态、小的基因组、短的生活史、丰富的种

5、子和易于被转化等。但是，盐芥对多种胁迫的耐受能力远远高于拟南芥，它在短时间内能耐受高达500妇m烈aCl的冲击，在盐适应前后既不产生盐腺也没有复杂的形态上的变化。因此，对盐芥硫氧还蛋白的功能研究对于研究植物氧化性伤害的产生和应答机制，对了解植物胁迫状态下的代谢变化和代谢调节，揭示植物的耐逆机理都具有重要意义。蚴基因家族蛋白成员主要存在于植物细胞质中，但也存在于内质网、线粒体中，不同的定位与其相应的功能相关。为了解nT砌匝的生物学功能，我们首先构建了Th蚴．GST融合基因表达载体，转化至DE3大肠杆菌，完

6、成ThlR)(11．GST融合蛋白的表达，为下一步研究盐芥硫氧还蛋白同靶蛋白的互作提供了条件。然后构建了ThT嬲1．EGFP融合基因植物表达载体，并用花侵染法转化拟南芥，不同的盐、氧化胁迫对转基因株系处理一段时间后，通过激光共聚焦显微镜检测不同胁迫对ThT购l亚细胞定位的影响。结果表明无论在胁迫条件下还是对照实验中，Tl】TRⅪ1都定位于细胞质中，定位并未发生改变。然后我们订购了ThTRⅪ1同源基因的拟南芥突变体，对拟南芥硫氧还蛋白突变体和转TllT脚l基因株系进行胁迫耐受性分析，为下一步做ThT脚l的

7、表型互补实验奠定一定的基础。我们的结果显示拟南芥硫氧还蛋白突变体萌发率明显低于野生型，转ThTRXh基因株系萌发率高于野生型，这l山东师琴盔毫竺旁靛拳争叁嚣冀耋冀薹萋薹薹

8、耋茎囊i爹耋F薹翼耄鑫蓑蒌辇冀薹萎蠢耋芷袋萋主li蓁辇f薹淫囊蕈萋霪雾囊霎隧蓁囊羹囊薹砸：鬃主萋毒垂囊孽萎筐蓁薹霪连妻霜季雾羹薹爹藿；}}}i萋荔孳謇墓；；妻；章羹?羹雯耋耋i鋈：；≥妻；；{彗譬妻雾雾ii

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11、archof劢扰口愕Z以趾^口J『印五觑zZ再％矗and彳r口6咖s豇．砌口以矗以口ZY嘞AbstractTheplaIltw鸽subjectedt0VariollsstI．essesi11eVitablyinitSli托cycle，such笛mesalt，drought，10wtempera_cureetc．intllee砌ystage，也eionbec姗eiIIlbal锄t．theag笋aVationoftllesesn．esseswe