常用液相色谱柱的规范化使用与保养标准操作程序道

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1、生效日期：颁发部门：新药研发部(盖章)附件：0新编/修订：新编SOP备注：SOP制定的理由：规范色谱柱的使用与管理；色谱柱标准化老化与再生；色谱柱常见问题分析与解决；通过SOP的实施，降低色谱柱使用成本，提高分析人员色谱柱使用与维护水平。作者：签名及日期：Chengrui审核：QTLFYJLFDSLLB批准：WYQ分发：原料药研究部制剂研究一部制剂研究二部制剂研究三部中试中心目录页码1.目的32.范围33.责任34.定义35.程序3〜256相关文件257.参考资料258.其它251目的规范液相色谱柱的使用与管理；液相色谱柱标准化老化与再生；剖析液相色谱柱常见问题与解决办法。延长色

2、谱柱使用寿命，降低色谱柱使用成本。提高分析人员液相色谱柱使用与维护水平。2范围木SOP适用于原料药研究部、制剂研究一部、制剂研究二部、制剂研究三部、中试中心使用色谱柱的仪器分析操作人员及相关管理人员。3责任本程序由新药研发部组织实施，并由相关部门经理及药学研究助理监督，设备仪器操作人员具体执行。4定义液相色谱柱：指用于液相色谱分离的柱形固定相，由柱管、压帽/卡套、筛板(滤片)、填料、接头等组合而成，可用于液相色谱分析与制备。色谱柱再牛：指色谱柱在非正常情况下，针对异常现象及原因采取的一系列修复补救措施，以提高色谱柱柱效和延长其使用寿命的处理过程。运载溶剂(ShippingSolv

3、ent):指色谱柱生产厂商在柱出厂测试合格后饱和于色谱柱内的合适溶剂，以利于运输保存，多与保存溶剂相同。保存条件(StorageConditions):指色谱柱牛产厂商根据不同柱类型及其色谱柱填料的制备、键合、装填、高压定型、净化干燥等工艺条件的不同要求而特别制定的色谱柱保存前净化饱和的处理程序与储存条件，包括净化程序、净化溶剂和保存溶剂、保存条件。保存溶剂(StorageSolvent):用于保存色谱柱并指定了溶剂组成与比例的溶液。5程序5」液相色谱柱的分类目前，我公司色谱分析涉及到的液相色谱柱主要有6大类，具体详见5.2。5.2液相色谱柱的使用与保养(仅列举常用分析柱)5.2

4、.1液相色谱柱的老化处理与使用保养程序新购色谱柱出厂前均采用适合的运载溶剂(ShippingSolvent)饱和，密封，由于运输过程周期较长，踩苑赘珊裕孕轮褂们靶柚醜卤欠陀彤匣H衾匣椒G徽坊蝴奔测还唬椎贾律字谑褂媒隙淌奔浜蠹床掷攵认陆怠7.逍伪浙睢7.逋衔驳戎档偷那榭觥P鞋草字煌嘈脱三癫煌欠陀彤匣椒製1、普通C8及C18反相色谱柱(C8ampC18Reversed-phasechromatographycolumn):(1)准备新鲜超纯水及色谱级乙睛或甲醇，冲洗色谱仪器系统，保证仪器系统管路干净。(新柱老化前，此步决不可忽略)(2)将色谱柱反向连接，不接检测器。用水•有机相(90

5、：10〜95:5),以0.3〜0.6ml/min流速冲洗20〜30mino（目的是冲洗出柱入口端无机杂物与筛板孔杂物，使筛板正常）（3）再将色谱柱正向连接，不接检测器。用水■有机相（90：10〜95:5）,以0.3〜0.6mI/min流速冲洗20〜30mino（目的是冲洗出柱出口端无机杂物与筛板孔杂物，使筛板正常）（4）连接检测器，开启柱温达30°C〜40°C,用水-有机相（90：10〜95:5）,以0.3〜0.6mI/min流速冲洗4h以上。（目的是充饱和色谱柱，去除柱内空气）（5）用水■有机相（10：90〜5:95）,以0.3〜0.6ml/min流速冲洗2h以上或机（95:5

6、-＞0:100）在120min内以水•有相以梯度变化,0.3〜0.6ml/min流速冲洗—再用100有机溶剂，以0.3〜0.6ml/min流速冲洗lh以上—最后用100有机溶剂，以lml/min流速冲洗lh以上。（目的是老化色谱柱）（6）在平衡前根据水相■有机相的比例，首先调整水■有机相的比例接近流动相水相■有机相的比例，以lml/min流速冲洗30左右（目的是相平衡过渡）。如果流动相中含有缓冲盐，决不可在柱老化后立即用流动相平衡，必需先用90以上水进行预平衡30min以上，否则，会导致缓冲盐在柱内析出结晶，严重时会将新柱永久不可逆地损坏。（7）然后更换成新制并经0.45um滤膜

7、过滤，超声脱气后的流动相，按检测方法平衡至少lh,待基线稳定后，开始进样检测。（8）由于是新柱首次使用，在进样完成后需立即对色谱柱进行净化和有机溶剂饱和。方法是：用水■有机相（90：10-95:5）,以0.6ml/min流速冲洗lh以，上一＞再用水■有机相（90：10〜95:5）以1ml/min流速冲洗30min以上（或者采用溶剂梯度变化至100有机相冲洗120min以上）一＞最后用100有机溶剂，以lml/min流速冲洗lh以上。若流动相中有缓冲盐，建议用100水冲洗lh以上后