ucmscs和ecfcs在糖尿病小鼠下肢血管病变中的成血管作用

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1、中图分类号UDCR587．2610学校代码密级硕士学位论文10533UCMSCs和ECFCs在糖尿病小鼠下肢血管病变中的成血管作用Angiogenesisofhumanumbilicalcordmesenchymalstemcellsandendothelialcolony--formingcellstransplantationinthelowerlimbischaemiamodelof●■●diabeticmouse作者姓名：刘小银学科专业：临床医学研究方向：内科学学院(系、所)：湘雅三医院指导老师：莫朝晖教授

2、论文答辩日期型!：竺：兰j答辩委员会主席中南大学2013年5月／多刃．原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：掣日期：卫年』月_日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部

3、门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：坠l±丝导师签名．坦日期尹!!年』月2日、时UCMSCs和ECFCs在糖尿病小鼠下肢血管病变中的成血管作用摘要目的：研究探讨脐带间充质干细胞(humanumbilicalcordmesenchymalstemcells，UCMSCs)、脐血来源的内皮克隆形成细胞(，endo

4、thelial．colonyformingceils，ECFCs)及两种细胞联合移植治疗糖尿病小鼠下肢血管病变的有效性、疗效比较并初步探讨其促进血管新生的机制。方法：1．建立糖尿病小鼠模型：将60只6周龄雄性C57BL／6J小鼠，腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)150mg&g，分别在注射后第3天及第7天测随机血糖，其中50只小鼠两次随机血糖>16．7mmol／1，为糖尿病小鼠模型构建成功；2．动物分组：将50只成功建立糖尿病模型的小鼠随机分成五组，A组为UCMSCs移植组(n-10)，B组

5、为ECFCs移植组(n_10)，C组为UCMSCs和ECFCs联合移植组，D组为对照组，注射PBS(n=10)，E组为假手术组(n-10)；3．制备糖尿病小鼠下肢缺血模型：采用结扎并离断左侧下肢股动脉、股静脉部分分支的方法成功构建糖尿病下肢缺血模型，包括3组血管，即股浅动脉、股浅静脉、胭动脉、胭静脉、大隐动脉、大隐静脉；4．观察指标：观察移植前后糖尿病小鼠缺血下肢皮肤的颜色的变化及伤口愈合情况，测定下肢缺血模型建立前后及干细胞移植后21天各组小鼠下肢皮温及经皮氧分压(TcP02)，应用CM．Dil染料标记移植干细胞

6、，观察干细胞的迁移、分化情况，应用免疫组化法比较各组小鼠腓肠肌的血管密度，应用Westernblotting方法检测各组小鼠腓肠肌中VEGF、Ak及Erkl／2蛋白含量。结果：1．建立下肢缺血模型后，小鼠下肢出现皮肤颜色变暗、趾端及趾甲发黑等缺血表现，与D组比较，A、B、C三组小鼠干细胞移植后下肢缺血情况改善，血流较前恢复：A、B、C组小鼠伤口愈合时问较D组短，差异均有统计学意义(P

7、(P>O．05)。2．A、B、C、D组小鼠左下肢皮温及TcP02较建立缺血模型手术前明显下降(PO．05)；干细胞移植后21天后，A、B、C组小鼠左下肢皮温及TcP02较移植前均有升高(PO．05)，其中C组小鼠皮温及TcP02与A、B组小鼠相比较升高最显著(PO．05)。3．UCMSCs和ECFCs均可归巢、迁移到小鼠下肢腓肠肌肌纤维周围，其中在血管周围可见标记后的UCMSCs。4．A、B、

8、C三组小鼠下肢腓肠肌血管密度明显高于D组及E组，差异有统计学意义(分别为P