四氟乙烷提取青蒿素研究

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1、第～章文献综述物的化学合成研究⋯01。1994年，Zhou和Xu【1l】综述了国内外青蒿素全合成的研究进展。青蒿素全合成研究虽已取得～些明显的进展，但到目前尚未显示出商业上的可行性。争i彼一致母一毁H：HH：甲；C图1．3青蒿素的化学合成路线图Fig．1·3Chemsymheticp砸hwaysofanemisinin1．3．2青蒿素的生物合成了解青蒿中青蒿素的生物合成途径与该药的生产密切相关。包括：(1)通过添加生物合成的前体来增加青蒿素的含量；(2)通过对控制青蒿素合成的关键酶进行调控，或者对关键酶控制的基因进行

2、激活来大幅度增加青蒿素的含量：(3)利用基因工程手段来改变关键基因以增强它们所控制酶的效率。由于萜类化合物的生物合成途径非常复杂，因而对于青蒿素这一类低含量的复杂分子的生物合成研究就更具复杂性。对于倍半萜内酯的合成，其限速步骤一是环化和折叠成倍半萜母核的过程，另一个限速步骤为形成含过氧桥的倍半萜内酯过程。AkhilaA掣12J通过放射性元素跟踪法对青蒿素的生物合成途径进行了研究，认为青蒿素的的生物合成途径应该是从法尼基焦磷酸出发，经牦牛儿间架、双氢木香交酯、杜松烯内酯和青蒿素B，验证并合成了青蒿素。国内也进行青蒿素生

3、物合成的研究，探索了由【2．14c】．MVA为前体生物合成青蒿酬13J，以及由青蒿酸为前体生物合成青蒿素及青蒿素B的过程【14】。第一章文献综述1．3．3植物组织培养合成青蒿紊利用植物组织培养来生产青蒿素是目前青蒿素研究的另一热点，可能成为大规模生产青蒿素的重要手段。自80年代以来，植物组织培养生产青蒿素的研究工作已进行不少，已经在青蒿愈伤组织、悬浮细胞、芽和毛状根等培养体系中进行了青蒿素合成的探索。贺锡纯等115】对青蒿的愈伤组织、带芽的愈伤组织和由愈伤组织分化产生的小植株中青蒿素的合成进行分析，认为青蒿愈伤组织中

4、不含青蒿素，在愈伤组织伴随芽分化形成时，检测到青蒿素的含量约为干重的O．008％，而在分化苗长成的植株中，青蒿素的含量达到干重的0．92‰高于野生植株。Nair等【16】在进行青蒿愈伤组织悬浮培养时，在愈伤组织中未检测到青蒿素的存在，但在悬浮培养液中检测到微量的青蒿素(8峙／mL)。同样在Brown【17】的研究中也证实了青蒿的愈伤组织中不含萜类，但在分化的芽中检测到和亲本相似的萜类合成物。TaWfit等【18】在研究青蒿悬浮细胞培养时，在培养物中没有检测到青蒿素的合成，但在培养液的正己烷提取物中检测到抗疟的活性。P

5、anie90掣19】在新诱导的青蒿愈伤组织中检测到青蒿素的含量约为干重的O．08％．0．1％，此培养物经三次继代培养后，愈伤组织内青蒿素的含量几乎难以检测到。由此可见，在未分化的青蒿植物组织中不含或含有极低水平的青蒿素，而一定的组织分化则可促进青蒿素的合成。、№erdellbag等【20】在诱导的青蒿芽培养物检测到青蒿素的存在，并对营养物和激素对青蒿芽生长和青蒿素的影响进行研究，发现赤霉素和水解酪蛋白等对芽中青蒿素的合成具有强的刺激作用。Fellreira掣21】在青蒿芽的培养过程中，同样检测到青蒿素的存在，并在诱导

6、生根的青蒿芽中获得了高含量的青蒿素，约为干重的0．287％。Paniego等122J建立了转基因的青蒿芽培养物，其青蒿素含量稳定，约为干重的0．02％，改进培养基中的各种金属离子和复合维生素对芽中青蒿素的合成影响不明显，但添加赤霉素使得芽中青蒿素的含量提高了3．4倍。1994年，秦明波掣23】用发根农杆菌1601成功转化青蒿幼茎获得毛状根培养物，提供了以发根农杆菌作为基因载体进行青蒿的遗传改造的可行性。与此同时，Weathers等124J利用发根农杆菌15834感染青蒿的芽尖和叶片，获得青蒿毛状根培养物，并且检测到青

7、蒿素的含量约为干重的0．43％，其含量远高于其它青蒿组织培养物中青蒿素的含量。蔡国琴等【25】利用发根农杆菌1601感染青蒿叶片建立了毛状根培养系，并在培养物中检测到青蒿素，在添加赤霉素的条件下青蒿素的含量约为干重的0．2％。Ve唱auwe等【26】利用根癌农杆菌感染青蒿叶片，获得转基因植株中青蒿素含量约为干重的0．17％，青蒿素合成前体青蒿素B的含量约为0．22％，为通过转基因植物量产青蒿素奠定基础。第一章文献综述目前，青蒿组织培养的研究工作主要集中在利用生物技术的手段来进行组织培养物的改进和高青蒿素含量培养系的筛

8、选和建立，对于利用生物反应器培养青蒿组织来生产青蒿素的研究工作尚处于起步阶段。Fukle掣z7】利用1L生物反应器进行青蒿芽的悬浮培养，经过30天的分批培养可获得再生的植株，生物量提高了4．5倍。Park掣28】利用2L的长方形气提式生物反应器培养青蒿芽，经过4周的培养，培养物增殖8倍，获得的青蒿芽可长出不定根。我们目前与中国科学院植物所合作，