分子生物学技术在微生物检验中应用

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1、分子生物学技术在微生物检验中应用邛睐市中医医院四川邛睐611530【摘要】伴随着科学技术的发展，分子生物学技术的应用大大改变了以往传统的微牛物检验方法，而随着微牛物检验涉及领域的不断扩展，分子牛物学技术应用于微牛物检验的优势也逐渐凸显出来，这一技术可通过研究生物大分子的结构、功能及牛物合成等来达到检验的目的，满足了微牛物检验结果精确性的要求，木文将主要介绍分子牛物学技术中的PCR技术、基因芯片技术、核酸探针技术在微牛物检验中的应用，并对分子生物学技术在微生物检验领域的应用前景作出一定的展望。【关键词】分子牛物学技术；微牛物检验；应用当前分子牛物学技术主要是针对牛

2、物大分子■核酸及其表达产物・蛋白质的结构、功能、调控、相互关系及作用等进行研究的一门科学⑴，它能够从RNA、DNA水平上检测出一些微牛物，现阶段已成为了微牛物检测中不可缺少的检验技术之一。其中聚合酶链式反应（PCR）技术可用于病原菌的检测，基因芯片技术及核酸探针技术的诞牛也为微牛物检验开辟了更佳的途径，在提高微牛物检验精准度的同时，也大大节省了微牛物检验的时间，推动了牛物学研究的发展。1利用PCR技术诊断淋病1.1材料与方法所有标木取自性病门诊患者共57份，其中勇性33例，女性24例，于淋病另性患者尿道口处取材，于淋病女性患者宫颈口内取材，棉拭插至取材处，转动并

3、停留数秒，将拭子于ImL等渗盐水、零下20°C冰箱中保存；另取淋球菌标准株Wl、WII、Will作为金标准，淋球菌用加多黏菌素的GC血液琼脂进行培养。PCR试验根据PCR设计软件设计引物，将标木加到PCR反应管中，随即加入101基因释放剂，然后经变性、退火、延伸等步骤后取最终反应产物201,加入41电泳指示液，在1.5%琼脂糖凝胶上作电泳，用手提式紫外灯观察电泳结果并照相。1.2结果参照金标准，检出PCR阳性35例，PCR阴性22例，PCR的敏感性为97.1%(33/34),特异性为91.3%(21/23),阳性预期值为95.5%(21/22)。见表1。1.3结

4、论1985年PCR技术首次出现，PCR技术是在体外对一些特定DNA片段进行迅速扩增的一门技术，通过变性、退火、延伸实现目标DNA和引物的特异性扩增［2］。PCR技术是在同一聚合酶链反应管中加入多种病原微生物的特异性引物,进行聚合酶链式反应扩增，实现多种微生物同时检验的效果。可检验的病原微生物组合包括：多种肝炎病毒重叠感染，比如甲乙或乙丙型病毒二重感染、甲乙型肝炎病毒重叠感染等；肠道致病性细菌，比如伤寒、痢疾、霍乱，同--病人可能同吋患有痢疾和霍乱；用于精确检验梅毒、淋病、艾滋病等性病；检验伤口感染细菌和生物战剂细菌，比如破伤风杆菌、炭疽杆菌、鼠疫杆菌等；无芽砲厌

5、氧菌的检测，比如鉴定脆弱类杆菌及艰难杆菌等。PCR技术可检验常规方法难以检验的形态及生化反应不典型的微生物，且不受混合标本的影响，可鉴定一些生长缓慢或需特殊培养的微生物，但其也存在假阳性、RNA病毒检验操作繁琐等缺陷。2基因芯片技术基因芯片技术融合了微电子学、生物学、计算机科学等多门技术，它是以玻片、尼龙膜等为载体,将大量生物活性分子高密度有序排列在在单位面积上，实现对多种致病微生物的检验。基因芯片技术可检测出微生物的遗传信息，在基因序列分析、病原微生物感染的诊断、变异及耐药机制的研究中应用广泛，相较于传统的微生物检验技术，基因芯片技术可检验出抗体产生前的感染，

6、及早判断岀患者是否已经感染，能够快速直接确定病原体类型，另外基因芯片技术具有更高的准确性，可检验出其他方法不能检验出的感染问题，确定感染的范围及程度[3]。总之，基因芯片技术具有样品需求量少、检验效率高等优点和高度的多样性、自动化、并行性及微型化特点，而随着这一技术的不断发展，在不久的未来可能实现同一芯片上检验出更多病原微生物，实现病原微生物药敏性的检测。3核酸探针技术核酸探针技术基于碱基互补原则，将带有标记的DNA片段特异性地与目的DNA进行杂交，对标记物进行追踪实现微生物的检验。核酸探针技术可用于检验无法培养、无法进行生化鉴定、不能观察的微生物；肝炎病毒、流

7、行病学调查等也应用核酸探针技术；核酸探针技术还可检验细菌内的抗药基因，分析食品是否被耐药菌株污染等；这一技术可对细菌进行分型，比如tRNA分型；相较于传统的检验方法，核酸探针技术还能够有效检验出由植物病毒寄生引起的病害⑷。周勇太等利用生物素标记的弯曲菌探针对弯曲菌进行检验，结果显示探针均未与非弯曲菌、发生交叉反应，探针敏感度可检出8昭样品DNA,较P32标记的探针低，但其克服了同位素标记存在的半衰期短、操作困难等问题。结语：传统的微生物检验方法主要是对微生物的外在形态、结构特征进行分析,比如单从微生物的代谢产物、酶活性等表性特征进行研究，而这很难保证检验的准确性

8、，即使针对同一种微生物，