neuritin在大鼠脑外伤合并骨折中的表达与作用分析

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1、石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版

2、。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日前言颅脑损伤和四肢骨折是各种高能量、高冲击力和高暴力所致的机体多发性损伤中最常见的类型之一，此病最常见于车祸、高处坠落或者重物砸伤等情况。随着社会经济的迅猛发展，物流条件的改善和交通工具逐年增加，其发生率不断攀升，部分严重的患者经过各种不同方式的治疗及康复训练后仍会出现骨缺损、骨折延迟愈合和骨不愈等，其所带来的严重程度亦明显加重受害者在工作、学习和生活质量，它不仅给骨科专业的医疗人员在工作中增加困难的同时也带来了新的挑战，而且给患者及家属的身心健康和社会进一步发展也带来了阻碍的影响。多年来在长期大量骨科的临

3、床实践及科学研究的过程中均观察发现了一个奇怪而有趣的现象，在四肢骨折合并中枢神经(脑)损伤的患者往往可以见其骨折愈合加快,骨[1,2]痂形成量增多,甚至肌肉中和某些关节周围出现异位骨化现象，但是单纯骨折的愈合速度与其比较明显慢于没有合并中枢神经损伤的患者。这一现象促使科研人员的思考一些相关问题是脑损伤与骨折修复之间存在着怎样的相关性呢？终究合并脑外伤的骨折愈合加速的机理是如何的呢？近年来国内外众多专家及学者对其进行的基础实验、临床病理生理、保守及手术治疗和后期康复等多方而做出了大量的研究，迄今为止脑外伤合并骨折所致的愈合加速仍然存在争论，探究其具体机制还没能够有一个确切的定论。[3]Ne

4、uritin是自1993年发现的一类新的与神经可塑性相关的神经营养因子,也是一种广谱表达的小分子蛋白质或多肽分子。其Neuritin基因分布最多的常见为脑组织，[4]其次为肝脏和肺脏，在心脏，骨骼肌等组织中也有表达在脑组织中，Neuritin的分布以齿状回最高，其次为海马，大脑皮层和小脑。研究发现Neuritin可以被神经活动和神经营养素诱导,其表达产物能够维持神经元的存活和突起生长、分化、存活和防止神经细胞退变或凋亡的功能，在神经系统的发育、神经元树突的生长以及神经损伤修复等[5]病理生理过程中都显示出极其重要的作用。最近国内的余龙等通过研究发现,Neuritin可增强血管内皮细胞的粘

5、附和迁移能力，促进血管生长。随着科研人员对研究Neuritin作用机制的逐步深入，目前相关于Neuritin对骨折愈合的影响也越来越受到人们的重视。本实验研究旨在通过脑损伤液压打击仪器建立大鼠弥漫性中度脑损伤模型和股骨骨折模型，用酶联免疫吸附法检测不同时段的血清Neuritin吸光度值，取骨折断端处骨痂做X线拍片、苏木精一伊红染色（HE）和免疫组织化学染色,观察SD大鼠在股骨骨折合并脑损伤以及比较单纯股骨骨折时血清中Neuritin含量及骨痂内Neuritin的表达和变化;探讨Neuritin在大鼠脑损伤合并骨折后的骨折加速愈合中可能的作用机制,以期通过实验研究对为临床选择相关治疗骨不连

6、、骨折不愈合及难愈性骨创伤修复等艰巨骨科专业的相关问题提供一定的理论依据。材料和方法（Materials&Methods）1材料1.1实验动物清洁级96只雄性Sprague—Dawley(SD)大鼠，体重280g～300g，由新疆维吾尔自治区动物实验中心提供。动物许可证编号：SCXK(新)2003-0002。1.2实验场所（1）SD大鼠饲养场地新疆维吾尔自治区动物实验中心；石河子大学医学院第一附属医院中心实验室；（2）SD大鼠实验场地；石河子大学医学院生理、病理实验室；兰州军区乌鲁木齐总医院动物实验科；石河子大学医学院第一附属医院中心实验室；1.3试剂（1)Neuritin的ELISA试

7、剂盒(美国RD有限公司)；（2)Neuritin(北京博奥森生物技术有限公司)；（3)兔抗鼠Neuritin一抗（北京博奥森生物技术有限公司）；（4)兔IgG（武汉博士德生物工程公司）；（5)ABC免疫组化试剂盒（武汉博士德生物工程公司）；（6)伊红、苏木素染液(广州化学试剂厂)；（7)DAB显色剂；PBS缓冲液(兰州军区乌鲁木齐总医院动物实验科提供)（8)10％水合氯醛:水合三氯乙醛l0g加入100ml蒸馏水，溶解备用(石河子大学