细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶编码基因的克隆、表达及抗原性研究

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1、兰州火学硕士学位论文V原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立进行研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人已经发表或未发表的成果、数据、观点等，均已明确注明出处。除文中已经注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究成果做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：耋麴关于学位论文使用授权的声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属兰州大学。本人完全了解兰州大学有关保存、使用学位论文的规定，同意学校保存或向

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3、nococcus)绦虫的幼虫引起的一种全球分布的人兽共患性寄生虫病。目前公认对人致病的棘球绦虫有4个种：细粒棘球绦虫(Echinococcusgranulosus,Eg)、多房棘球绦虫(Echinococcusmultilocularis,Em)、少节棘球绦虫(Echinococcusoligarthrus)和伏氏棘球绦虫(EchinococcusvogeL)。这4个种在成虫和幼虫期形态各不相同IlJ，并可引起不同类型的棘球蚴病。严重影响人类公共卫生及健康事业的的两个虫种是细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫，分别引起囊型棘球蚴病(Cystic

4、echinococcosis，cE)或囊型包虫病(CysticHydatiddisease，CHD)和泡型棘球蚴病(Alveolarechinococcosis，AE)或泡型包虫病(AlveolarHydatiddisease，ARID)。细粒棘球绦虫呈世界性分布，欧亚大陆(尤其地中海沿岸国家、俄罗斯联邦、中国)，北非和东非、澳大利亚以及南美洲的部分地区都有分布，在畜牧业生产地区感染率最高。我国是棘球蚴病高发国家之一，主要流行于西部地区的牧区和半农半牧区，以新疆、青海、甘肃、宁夏、西藏、内蒙和四川西部最为严重[21。2001．2004

5、年完成的全国人体重要寄生虫病现状调查结果表明，棘球蚴病流行区12个省市人群的血清学阳性率高达12．04％，在西部地区流行仍较严重【31。控制棘球蚴病主要是通过切断棘球绦虫流行环节，包括驱虫治疗终宿主(犬)感染棘球绦虫，阻断虫卵的播散，防止中间宿主的感染。但就西北牧区而言，由于经济发展落后，大多牧区处在山区或荒漠和半荒漠地区，牧民多以游牧为主，他们的某些不卫生的生活习俗及缺乏相应的科学文化知识等因素致使棘球蚴病在某些地区长期流行，必须采取综合防治措施方能奏效【"J。目前，用于预防人感染棘球蚴的疫苗尚停留在动物试验阶段，治疗主要以外科手术

6、切除包囊为主，药物治疗为辅。那么筛选敏感、特异性的诊断抗原，建立简便、快速、实用的诊断方法，做到早发现，早治疗，早康复就成为了近年来研究的热门课题之一。目前临床诊断包虫病依然采用免疫学与影像学相结合的方法，而免疫学实验中由于包虫抗原的复杂性，大多存在非特异性反应和虫种间交叉反应【6】，成为免疫诊断研究所面临的最大难题。近年来随着免疫学、分子生物学发展和基因工程技术的日趋成熟，使人们能够鉴定、分离并合成各种有诊断作用的兰州大学硕士学位论文抗原及抗原亚单位，此外，通过基因工程技术可以大量生产所需的重组蛋白分子，从而克服天然抗原来源困难及与

7、其他寄生虫病间存在的交叉反应。迄今为止，尚未建立起用于诊断人感染棘球蚴的标准、特异、敏感的免疫学诊断方法【7l。因此对新发现抗原的鉴定、抗原制备工艺提高以及诊断技术工作标准化，依旧是包虫病免疫学诊断研究的重点。由于细粒棘球绦虫缺乏过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性，但却存在EgTPx活性，因此EgTPx在清除虫体自身代谢产生的活性氧族和拮抗宿主免疫细胞产生的活性氧族损伤中起到了重要作用。重组EgTPx已被证明具有巯基依赖的过氧化物酶活性，有着强抗氧化剂的作用，EgTPx在细粒棘球绦虫发育各个阶段均有表达，其中原头节中表达量最大，定位于

8、虫体皮层和皮下层，具备了作为有效抗原的基本条件，能够诱导宿主产生特异性的免疫应答la-gl。重组EgTPx用于WesternBlot和ELISA试验检测人棘球蚴病，具有较高的特异性和敏感性【10】；并且可以被部分棘球蚴感