transwell非直接接触人培养条件下髓核细胞诱导bmscs向髓核方向分化

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1、江苏大学硕士学位论文Transwell非直接接触人培养条件下髓核细胞诱导BMSCs向髓核方向分化姓名：陈亮申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：黄永辉20120605江苏大学硕士学位论文摘要目的：transwellt}接触共培养条件下，研究髓核细胞(NPC)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)的诱导作用，从而为椎间盘退变干细胞治疗及组织工程治疗的可行性奠定理论依据。方法：全骨髓法培养大鼠BMSC并鉴定，取第三代BMSCs及NPC复合藻酸盐接种于Transwell共培养系统中，上室接种BMSCs藻酸盐复合物，下室接种髓核细胞(

2、NPCs)藻酸盐复合物。共培养7天后回收上层BMSCs。RT-PCR方法检测II型胶原(TypeIIcollagen)、Sox一9和多功能蛋白聚糖(Versian)的mRNA表达情况。结果：共培养组II型胶原(TypeIIcollagen)、Sox．9和多功能蛋白聚糖(Versian)的mRNA表达情况均接近正常髓核细胞。结论：共培养条件下髓核细胞能诱导BMSCs向髓核方向分化。【关键字】sox9；骨髓间充质干细胞；藻酸盐；组织工程学；髓核；椎间盘退变Transwell非直接接触共培养条件下髓核细胞诱导BMSCs向髓核方向

3、分化ABSTRACTObjectiveDifferentiationofbonemarrowmesenchymalstemcellscombiningalginategelstentsintonucleuspulposuswithintranswellculture6-wellplate．Toprovidetheoreticalbasisforimplantedintointervertebraldisctopreventandreverseintervertebraldiscdegeneration．MethodsBMS

4、Cswereisolatedandpurifiedbyadherentculture．NPcellsandBMSCscombiningalginategelstentswereCO—culturedwithintranswellculture6-wellplatefor7days，afterthat，wequantifiedTypeIIcollagen、Sox一9andVersianinBMSCsfromtheculturesystemusingRT-PCR．ResultsThemRNAofTypeIIcollagen、S

5、ox一9andVersianshowedpositiveandpromptedthedifferentiationofBMSCstotheNPCs．ConclusionBMSCscanbedifferentiatedintoNPCswithNPontheplanealginategels．[Keywords]sox9；Bonemesenchymalstemcell；Alginate；tissueengineering；nucleuspulposus；intervertebraldiscdegeneration；江苏大学硕士

6、学位论文英文缩略语BMSCs(bonemesenchymalstemcells)MSCs(mesenchymalstemcells)NPCs(nucleuspulposuscells)TypeIIcollagenVersianHLA(humanleucocyteantigen)EDTA(Ethylenediaminetetraaceticacid)FBS(fetalbovineserum)DMEM(dulbecco’Smodifiedeagle’Smedium)IVD(intervertebraldiscdegenerat

7、ion)RT-PCR(reversetranscription—polymerasechainreaction。R-r-PCR)V骨髓间充质干细胞间充质干细胞髓核细胞II型胶原多功能蛋白聚糖人类白细胞抗原乙二胺四乙酸胎牛血清改良伊格尔氏培养基腰椎退行性变反转录·聚合酶链反应江苏大学硕士学位论文第一章前言1．1腰椎退行性变的特征腰背痛在现代社会正常人群中所占的比例呈升高趋势n1，已越来越得到人们的重视。在西方社会120／'o．-．35％的人患有下腰痛，而引起腰背痛的主要原因为椎间盘退变(intervertebraldiscd

8、egeneration，IVD)。关于椎间盘退变的临床治疗方法包括卧床休息，牵引，椎间盘摘除，椎体融合等。但卧床休息与牵引只是暂时缓解了临床症状，未延缓或逆转椎间盘的退变，而各种手术虽去除了退变的椎间盘，但易产生术后腰椎不稳，导致临近椎体退变加速，远期效果不甚理想。随着组织工程学的出现和发展使得椎间盘退