p38mapk信号通路在逆灸防治阿尔茨海默病模型大鼠中的作用研究

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1、湖北中医药大学博士学位论文p38MAPK信号通路在逆灸防治阿尔茨海默病模型大鼠中的作用研究姓名：李熙申请学位级别：博士专业：针灸推拿学指导教师：孙国杰20120510中文摘要目的阿尔茨海默病(Alzhcimerdisease，AD)，是一种严重危害中老年人身心健康的中枢神经系统退行性疾病，临床表现为进行性的认知功能障碍、学习记忆能力减退、情感障碍、行为失常，最终导致生活自理能力丧失。在老年人群中，AD已成为继肿瘤、心脏病和中风之后的第四位死亡原因，给家庭及社会带来沉重的负担和痛苦。随着我国人口的老龄化，AD的发病呈现出较快的增长趋势，业已成为严重的公共

2、健康问题。由于AD病程较长，病情较重，中晚期AD的治疗效果不佳且治疗费用高，因此研究AD的侧重点应转向早期诊断和早期干预。本课题将聚集态AD："，立体定向注入大鼠双侧海马造成AD模型，通过逆灸“百会靠、“肾俞丹、“足三里"进行防治，研究p38MAPK信号通路介导的炎症反应在逆灸防治AD中的作用机制。方法健康雄性sD大鼠(15月龄)50只，体重350—4809，先进行Y型水迷宫筛选，淘汰反应过于迟钝或特别敏感的大鼠，将合格大鼠按随机数字表法分为4组，正常组、假手术组、模型组、逆灸组，每组1O只。逆灸组处理方法是对正常大鼠先施于艾灸刺激。于正常大鼠“百会"

3、、“肾俞"、“足三里"穴上方2—3cm处悬灸(“肾俞静、“足三里"左右隔日交替使用)，每穴持续5分钟，每日1次，6日为1疗程，疗程间休息1日，共3个疗程。施灸结束当日即开始给大鼠双侧海马区注射AD：¨。建立AD模型，造模后次日继续艾灸治疗1疗程。Morris水迷官行为学试验测定其学习记忆能力，透射电镜观察逆灸对AD模型大鼠海马CAl区神经细胞超微结构的影响，免疫组化SP法观察逆灸对AD模型大鼠海马区磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(P-p38MAPK)、炎症介质环氧合酶2(COX-2)、前列腺素E：(PGE：)表达情况的影响。全部数据输入计算机，用SPS

4、SI3．0统计软件包进行处理，实验结果以(i士s)表示。结果(1)从Morris水迷宫试验中我们发现，各组大鼠逃避潜伏期随着游泳天数的增加而逐渐缩短，说明各组大鼠在5天游泳训练中，对于寻找平台均有一定的学习记忆能力，但各组之间学习记忆能力有很大差异。AD：¨，聚集液立体定向注入大鼠双侧海马后，模型组大鼠5天平均潜伏期及后3天平均潜伏期均较其他组明显延长，穿过原平台位置的次数比其他各组明显减少。定位航行试验及空间探索试验中，模型组大鼠象限百分比亦明显比其他各组少，与正常组及假手术组比较，有极显著性差异(P<0．01)，说明模型组大鼠学习记忆能力显著降低，

5、双侧海马一次性注射Ap：¨，制备AD模型成功。与模型组比较，逆灸组大鼠5天平均潜伏期和后3天平均潜伏期均明显缩短，穿过原平台位置的次数明显增多，在实验平台象限的游泳距离占总距离百分比明显增高，经统计学分析，有极显著性差异(P<0．01)。说明逆灸是预防学习记忆障碍疾病的有效方法，逆灸对AD模型大鼠的学习记忆障碍具有明显改善作用。(2)透射电镜观察结果显示，正常组和假手术组大鼠海马CAl区神经细胞胞膜完整，细胞浆和细胞器电子密度均匀，线粒体结构清楚，线粒体嵴清晰可见，内质网排列整齐，未见明显病变。模型组大鼠海马CAl区神经元出现程度不等的退行性改变，神经

6、元体积缩小，一些固缩神经元散在分布于变性肿胀的神经元之间，细胞浆和细胞器密度增高，细胞核形态不规则，细胞器结构破坏，显示不清，内质网扩张，脂褐素沉积增多，线粒体数目减少，线粒体肿胀，基质清淡、有空泡，甚至见大量线粒体嵴呈畸形样改变或缺失．逆灸组大鼠海马CAl区神经细胞水肿减轻，线粒体、高尔基体、核糖体较模型组明显增多．细胞器可见内质网轻度扩张，线粒体轻度肿胀．逆灸对AD模型大鼠海马神经细胞的超微结构退变有明显改善作用．(3)模型组大鼠海马区P-p38MAPK、COX-2、PGE：的表达明显增加，表现为阳性神经元平均灰度值明显下降，与正常组及假手术组比较

7、，有极显著性差异(P<0．01)．逆灸组大鼠海马区P-p38MAPK、COX-2、PGE：的表Ⅱ达明显减少，表现为阳性神经元平均灰度值明显上升，与模型组比较，有极显著性差异(p<0．oi)．结论海马区注射AD：¨，可以激活p38MAPK信号转导途径，p38MAPK的激活导致炎症介质COX-2、PGE：的上调，从而诱导AD大鼠脑内神经元的退行性改变，引起大鼠学>--j记忆障碍。逆灸治疗可引起P-p38MAPK、COX-2、PGE：在海马区的表达明显减少，可抑制注射Ap导致的大鼠海马区神经细胞损伤变性，促进神经细胞的修复，逆灸对AD模型大鼠海马神经细胞的超

8、微结构退变有明显改善作用。逆灸防治AD的作用机制，可能是通过抑制p38MAPK信号通路，减轻炎