高度保守boule蛋白在精子发生中的功能及其调控机制的研究

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1、分类号：R3密级：单位代码：10312学号：20111055南京医科六掌硕士学位论文题目：直廑堡宣垦Q堕坠壁蛋白在糙壬发生生的功篚及甚遢控枧剑的硒宜研究生：指导教师：晏媛徐宇君教授、沙家豪教授学科专业：人体解剖与组织胚胎学学院名称：基础医学院完成时间：二。一四年五月南京医科大学硕士学位论文南京医科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要

2、贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：屡攘日期：加I峥年b月·1，日翩娩叼似吼年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“寸’)：l、保密口，在年解密后适用本

3、授权书。2、不保密13。作者签名：畏砖日期：厶I峥年I，月-L日导师躲引玩吼年月日南京医科大学硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4一、前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7二、实验材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1O三、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．28(一)、BoulemRNA和蛋白在精子发生中的动态表达和分

4、布⋯⋯⋯⋯⋯281、小鼠BoulemRNA的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．282、小鼠BOULE蛋白在睾丸组织中的特异性表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．303、小鼠BOULE蛋白在精子发生中的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．314、小鼠BOULE蛋白鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．325、小鼠BOULE蛋白在精子发生中的分布⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．33(二)、Boule缺失引起圆形精子细胞中mRNA水平全局性改变⋯⋯⋯．．351、BouleKO雄鼠中精予分化相关mRNA下调⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．，352、Bou

5、leKO小鼠圆形精子细胞mRNA差异表达谱分析⋯⋯⋯⋯一363、Boule缺失对靶标RNA的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37(三)、寻找BOULE调控的靶标RNA⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．38l、建立RIP(RNAImmunoprecipitation)方法来寻找BOULE靶标RNA⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．：；82、BouleRIP成功富集BOULE蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯393、BOULE蛋白所结合的RNA质量检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯404、鉴定BOULE蛋白所结合的RNA⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42(四)、Boule并非唯一拮抗miRNA以调控精子发生⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．44l、去除miRNA不能挽救Boule敲除导致的精子发生阻滞⋯⋯⋯⋯442、Boule；Dicer双敲小鼠中TPl；脚；mI，；砌以mRNA显著减少⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．z16南京医科大学硕士学位论文(五)、Boule可能在翻译水平调控精子发生⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47l、流式细胞仪分选纯化圆形精子细胞⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．472、BouleKO和WT小鼠圆形精子细胞蛋白差异表达谱⋯⋯⋯⋯⋯483、Boule缺失后下调蛋白参与生物学事件GO分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．494、BOULE蛋白参与mRNA翻译调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．50(六)、Boule调控人精子发生的机制研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯511、无精子症患者病理切面HE结果分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．512、人睾丸组织中BOULE蛋白鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．523、建立RIP(RNAImmunoprecipitation)方法来寻找

8、人睾丸中BOULE蛋白靶标RNA⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．534、鉴定人睾丸中BOULE蛋白所结合的RNA⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54四、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．55五、参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60六、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯66攻读学位期间发表文章情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯