盐诱导对提高小麦抗盐性生物学效应的研究

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1、河南师范大学硕士学位论文盐诱导对提高小麦抗盐性生物学效应研究姓名：王加传申请学位级别：硕士专业：细胞生物学指导教师：姬生栋20090401摘要为探究小麦的抗盐机理，寻找提高小麦耐高盐胁迫的最佳盐诱导浓度，研究不同基因型小麦耐盐效应差异及离子束转化对小麦耐盐性的影响，本文对新麦9号及其经离子束转化的3个高代稳定变异株系幼苗进行盐诱导，然后进行高盐胁迫，对盐诱导小麦的生长状况、蛋白质、蛋白水解酶和过氧化物酶表达差异进行了分析。本论文对新麦9号及其3个离子束转化高代稳定变异株系05．27．2、05．5．1及05．

2、3．1的幼苗在一叶一心时期先进行盐诱导处理，即以盐浓度为0、0．62、1．24、1．86、2．48、3．729NaCl／kg沙的6个处理进行诱导，待受盐害最重的处理幼苗开始恢复生长后再进行高盐胁迫。对盐诱导处理20天及高盐胁迫20天各盆幼苗进行株高分析；对不同处理幼苗能忍受的最高盐浓度(幼苗达半数死亡的最终总盐浓度)进行分析，旨在了解盐诱导对小麦幼苗的生长影响，寻找提高小麦抗高盐胁迫的最适盐诱导浓度，了解盐诱导对不同基因型小麦耐盐效应的差异；分别于盐诱导处理前、诱导处理第7天、14天、35天及高盐胁迫第12

3、天、18天、30天、48天对不同处理幼苗进行取材，采用SDS—PAGE技术和复性电泳技术进行蛋白质指纹分析、蛋白水解酶和过氧化物酶表达差异分析。通过生长状况分析发现：盐诱导时，0．629NaCl／kg沙浓度下的小麦幼苗长势最好；高盐胁迫时，经1．869NaCl／kg沙盐诱导的小麦幼苗表现出极强的抗盐性。变异株系05．27．2的抗盐性显著高于新麦9号，而05．3．1则显著低于对照。通过蛋白水解酶和POD电泳分析发现：在盐诱导初期，蛋白质水解酶和POD在各不同处理问差异不明显；盐诱导一周时，110、156和23

4、6kD三条碱性蛋白酶带的活性随着盐诱导的浓度变化发生显著的变化：30和84kD两POD酶带活性变化也非常明显，且在25和52kD之间酶带变化极为复杂，这些条带变化很可能与幼苗对盐渍环境的应答反应有极为密切的关系。通过蛋白质指纹分析发现：盐诱导处理第7天，74、174和189kD三条蛋白带随着盐浓度的增加而发生变化，在最高盐处理和次高盐处理的幼苗中缺失，这三条蛋白质带含量的增多与消失，可能直接与盐渍的应答反应密切相关；高盐胁迫第12天，在强抗盐能力幼苗中检测到80、113和177kD三条新的蛋白带且含量较高，

5、在抗盐性较弱的幼苗中没有检测到；高盐胁迫30天，抗盐性最强处理(经1．869NaCl／kg沙盐诱导处理)小麦幼苗中新检测到的225和233kD两条蛋白带，其它处理没检测到；对这5条新蛋白带的进一步研究，将为发现新的抗盐蛋白，进一步揭示小麦抗盐机理提供重要分子依据。结论：(1)一定浓度的盐诱导可以提高小麦幼苗的抗高盐胁迫能力；(2)1．869NaCl／kg沙是小麦幼苗在一叶一心期进行盐诱导的最适浓度；(3)小麦幼苗在盐渍．环境下的蛋白质、蛋白水解酶和POD的表达变化显著。(4)外源大豆DNA转化的小麦变异株系

6、对盐诱导和高盐胁迫应答有显著差异。关键词：小麦，盐诱导，盐胁迫，蛋白质，蛋白水解酶，过氧化物酶IlABSTRACTInordertoprobeintothemechanismofsalt—resistanceofwheatandtofmdtheoptimalconcentrationtoenhancetheabilityofwheatseedlingstosesisthighsaltstress，tostudythedifferencesofsalt-toleranteffectsofdifferentge

7、notypeandtheinfluenceofionbeamonwheatseedlings，thewheatseedlingsofTriticumaestivum厶CVxinmai9anditsthreehi【曲一generationandstablevariantsweresalt—inducedfirst，andthenwereexposedtohi咖saltstress，thegrowingconditionsofthewheatseedlingsandtheirprotein，proteinase

8、andperoxidaseexpressiondifferencewereanalyzedinthispaper．Inthispaper,thewheatseedlingsofTriticumaestivumL．CVxinmai9anditsthreehi曲一generationandstablevariantsweresaltinducedintheironeandahalfleavesstageby0,0．6