海南尖峰岭木本豆科植物根瘤菌多样性分析及潜在新种多相分类研究

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1、中国抹耄舛学坼宪院学位论文学位论文作者指导教师姓名指导小组成员申请学位级别专业名称研究方向论文答辩日期程涛焦如珍研究员孙启武副研究员董玉红助理研究员硕士土壤学土壤微生物2014年6月◎中国·北京DissertationfortheDegreeCandidate：Supervisor：AssociateSupervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：ChengTaoJiaoRu—zhenSunQi-WUDongYu—hongMasterSoilScienceDateofDefe：nce：2014．07Degree--Conferring

2、·-Institution：ChineseAcademyofForestry㈨蛐¨，一删沼一删8一帆2一㈣娩一㈣璩一删惺一㈣Y一=O—n一地地薹删一蒿耋一蛐迹．虿蔫耋㈣一独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得本研究生培养单位或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。⋯一签名锡日吵洱咖驴学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解中国林业科学研究院有关保

3、留、使用学位论文的规定，中国林业科学研究院有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权中国林业科学研究院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者毕业联系方式：工作单位：联系电话：18010157986电子邮件：chengta02020@hotmml．corn通讯地址、邮编：导师签名：鲥钟≯矽J绎易月多。日0禽夕q膨汐永巾名月签吖者F雠年，∥●，姘岬沦O倒a学摘要为筛选出高效固氮的木本豆科植物根瘤菌菌株和具备多抗性的根瘤菌菌株

4、，以充分发挥豆科植物与根瘤菌之间的共生固氮作用，保护木本豆科植物根瘤菌的种质资源，森林土壤研究室从海南尖峰岭自然保护区木本豆科植物的三个亚科二十四个种的根瘤里分离得到97株菌株。本研究通过16SrDNA序列比对，初步鉴定29株为根瘤菌。通过革兰氏染色法、平板观察法研究了这29株根瘤菌的形态特征、生理生化特性。发现有三株菌RIF200839、RIF200888和RIF200892对实验中的七种染料都有耐受性。有五株菌RIF200837、RIF200841、RIF200842、RIF200843和RIF200859对于脱氧胆酸钠和亚硝酸钠都能耐受。在生长温度方面，所有的29株菌株都无

5、法在60℃下生长，却都能耐受40。C的高温环境，并且，其中的16株菌株在4"C的低温环境能生长，分别为RIF200835、RIF200837、RIF200839、RIF200841、RIF200842、RIF200843、RIF200849、RIF2008571RIF200859，RIF200862、RIF200864、RIF200866、RIF200868、RIF200870、RIF200874和RIF200886。在酸碱耐受性方面，大部分的菌株都能够在pH=5～11的范围内正常生长，它们分别是RIF200814、RIF200829、对F200835、对F200837、ⅪF20

6、0839、RIF200841，RIF200842、RIF200843、RIF200845、R／F200849、RIF200853、RIF200857，RIF200859，RIF200861、RIF200864、RIF200866，RIF200868，RIF200873，RIF200874，RIF200886、RIF200888、ⅪF200889租RIF200892，耐受范围广，特别是菌株ⅪF200859在pH=4的环境下依然能够正常生长，值得深入探究。在抗生素的抗性方面，对于选定的阿奇霉素、林可霉素和阿米卡星三类抗生素，全部菌株都表现出了很强的抗性，推测菌株应该是带有相关抗性基因

7、的。与此同时，对在16SrDNA上同模式菌株RhizobiummiluonenseCCUAU41251丁的相似度分别为98．28％和98．51％的两菌株RIF200835和刚F200845进行了新种鉴定。通过对其进行全细胞组分的分析，包括全细胞脂肪酸组分分析和全细胞醌组分分析等的研究；还进行了持家基因atpD、glnlI、recA和rpoB分析研究。发现RIF200835和RIF200845在各种组分的分析上，都同模式菌株较为一致，仅在含量上稍有差异；。在持家基因方面的表现，两株