莱卡倒置显微镜使用

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1、一、运行程序：打开显微镜电源后，双击打开软件二、设定菜单栏禁止设置（非专业人员勿动）三、采集图片：（一）采集基本设置下有有三个设置参数:(Mic即microscope)一）设定：可进行物镜倍数切换，建议重低倍镜到高倍镜进行观察BF：明场，PH：相差，DIC：，POL：，FLUO：荧光Ap:孔径光阑Int.Fine：光强荧光激发光选择：I3（GFP）设置目镜与摄像头分光情况可存储上面拍摄的参数，建议连续拍摄多个样品使用（如芯片）二）:选择调焦（F精细，C粗调）后，把鼠标放在右侧，用鼠标滚动轮进行调焦（先粗调，后精

2、细）载物台移动调节快速/精确图中+为现在拍摄位置，任意点击框中地方，进行快速切换拍摄位置片子任意位置切换对比：在预设位置上，下拉窗口中选择位置1，点击保存更换位置后，下拉窗口中选择位置2，点击保存下拉窗口中选择位置1，点击，即可快速切换到位置1（如此类推）三）以下不建议使用：点击后→自动曝光→（不能调节增益）建议：不要使用自动曝光。曝光时间是指从快门打开到关闭的时间间隔，在这一段时间内，物体可以在底片上留下影像，曝光时间是看需要而定的，没有长短好坏的说法只有需要的讲法。曝光时间越大，摄像头反应就越长。对于很弱的

3、信号，曝光也不能无限增加，因为随着曝光时间增加，噪音也会积累。增益：拍摄图片时，增益不能调，需要放到最小。增益稍大一些，图像的噪声就出来了。画质反而不好。增益越大噪音越大，同等质量下的图片信噪比越低，图像质量越差。在不过曝的前提下，增加曝光时间可以增加信噪比，使图像清晰。（拍摄荧光时，用到该原理）饱和度是指的色彩饱合度。适可而止。调小了没色，调大了也会有噪声。建议参数1.5伽玛值的意义是增强亮部反差（伽玛值小于1）或者增强暗部反差（伽玛值大于1）。是一种非线性的亮度调整。即伽马调整是部分增强图片暗的部分和亮的部

4、分的对比所以拍摄荧光照片时，将伽玛值调大会感觉能增加暗荧光的亮度。建议参数0.6/1免疫组化拍摄方法：1.选择BF，5X倍镜下观察，调焦2.调节曝光时间，至适中（通过观察柱状图，为正态分布）。3.调节白平衡：用鼠标在片子空白的地方，左击拖拉→点击白平衡（可能需多次调整）1.每次转换陪数，都要重新调节曝光时间及白平衡注意：先调节曝光时间，再调节白平衡。勿调转。免疫荧光拍摄方法：拍摄荧光照片，一个是要调得背景黑，没有噪声点。二是尽量使微弱的荧光拍得明亮一些。一、在BF/PH下，选所需陪数，观察所需拍摄对象（操作同上

5、）二、拍摄荧光1.选择FLUO，选择激发光I3/N21/A2.将光强及视场光阑调至最大3.将增益调大，至观察到荧光；若无，稍调节曝光时间。当看到荧光后，调节焦距，寻找你想要的目的荧光。再把增益调至1.0X，同时把曝光时间调大，建议参数3s。（调节增益的目的：若当一开始就调节曝光时间，此时拍摄会很慢，因为时间由曝光时间决定，曝光时间越大，时间越长，反应越慢，所以建议找到目的荧光后，再调节，最后拍摄）4.此时，黑色背景可能有激发光的颜色，将伽马值调大，建议0.6。5.根据实际情况，进行曝光时间和伽马的调节。（拍摄荧

6、光照片时，把柱状图的下限稍微设置一点数值，比如5到10左右。能使背景干净一点。这也意味着比这个值小的荧光会被彻底抹黑）冷CCD就是靠降温减少噪音，从而可以长时间曝光拍摄弱信号重设摄像头：被人调得很乱时，使用（选择默认或test）→点击重置摄像机图像格式：采集格式：即拍摄的图片。活图格式：即屏幕上显示的图片。图像种类：彩色适用于BF/PH；灰度适用于荧光定量。柱状图：通过柱状图，可判断曝光时间是否合适。并可利用上、下限进行白水平及黑水平的应用阴影化：当镜头脏时应用。操作：拿掉样品→选择阴影化20X，拍摄时即自动应

7、用。勾选应用到活动图中，即在拍摄过程中可应用阴影化。锐化：一般选择无/低点曝光：拍摄荧光时，若想对某一部分进行局部强化，可用鼠标在该地方，左击拖拉→点击点曝光。图像会对该地方进行自动曝光。可设置标尺长度及单位一下为默认设置，不要动可通过移动色彩轮，进行调色，建议不适用色彩校准（色温）：亚洲人默认5000k一、浏览设置进行浏览拍摄的图片，设置拍摄图片存放的位置。选择拍摄图片存放的文件夹（强制放于E盘，拍完拷走，丢失由本人承担）选择E盘后，点击创建新文件夹，命名。选择自己的文件夹后，点击，此时，所选中拍摄的文件夹前

8、有一红点。移至拍摄文件夹界面设置：设置标尺及基本注解建议勾选显示比例尺/标注，即拍摄过程及拍摄的图片均显示设置注解：设置比例尺：比例尺尺寸根据放大倍数进行调整。浏览器调整图片显示大小，可通过滚轮进行调整。五、拍摄后图片处理：同上，但上面为拍摄过程就会添加，此为拍摄后图片添加。类似Photoshop处理图片拼接图像（将两有重叠部分图像进行拼接）1.选中图像2.右键→点击拼接图像3.点击凭