重庆部分奶牛场子宫内膜炎病原分析

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1、西南大学硕士学位论文重庆部分奶牛场子宫内膜炎病原分析姓名：周伟胜申请学位级别：硕士专业：临床兽医学指导教师：魏学良20120601摘要热应激对三个锦鲤品系的非特异性免疫及HSP70基因表达的影响水产养殖专业硕士研究生张崇英指导教师李云教授罗琳高级工程师为研究各品系锦鲤的抗逆机理、相互间的抗逆差别，本试验以红白锦鲤、昭和锦鲤、黄金锦鲤为研究对象，探讨持续热应激下三个品系锦鲤非特异性免疫指标和HSP70基因的表达量的变化。试验按3．5℃／ll的速度将水温从25℃升至32℃(升温时间为2h)，在32℃条

2、件下持续应激24h。分别子应激前、应激后o、4、8、12、16、20、24h取样，测定血浆补体蛋白3(c3)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、碱性磷酸酶(AKP)、髓过氧化物酶(M旷O)、全血呼吸爆发以及心脏组织HSP70基因的相对表达量。结果如下：(1)热应激下三个品系锦鲤全血呼吸爆发与应激前相比均没有显著性的差异(P>O．05)，应激前与应激后的整个过程中，昭和锦鲤和红白锦鲤呼吸爆发活力显著性高于黄金锦鲤CP<0．05)。(2)热应激下黄金锦鲤和红白锦鲤血浆C3含量增加，应激12～

3、24h血浆c3的浓度显著性地高于应激前的水平(P<0．05)。热应激下昭和锦鲤血浆C3含量降低，应激8～20h显著性低于应激前的水平(P0．05)。(3)热应激后三个品系锦鲤血浆SOD活力均没有显著性的差异CP>0．05)。热应激前后的整个实验过程中，黄金锦鲤血浆SOD活力显著性高于红白锦鲤和昭和锦鲤(P<0．05)。(4)热应激下

4、，黄金锦鲤血浆MDA含量总体呈下降趋势，应激8～24h黄金锦鲤血浆MDA显著性低于应激前的水平(P

5、～24h黄金锦鲤显著性的高于应激前的水平(p<0．05)，应激后12～16h红白锦鲤显著性的高于应激前的水平(尸<0．05)。应激后昭和锦鲤血浆舢四均低丁应激前的水平，应激后20h显著性低于应激前的水平(P<0．05)。应激前和应激后0～4h，血浆舢四人小为昭和锦鲤>红白锦鲤>黄金锦鲤，应激后8．24h血浆AKP大小为红白锦鲤>昭和锦鲤>黄金锦鲤。(6)热应激后黄金锦鲤和红白锦鲤血浆MPO与廊激前的水平相比均无显著性的变化(P>0．05)。应激后昭和锦鲤血浆MP0的水平均高丁二应激两南人学硕十学位

6、论文前的水平，应激后12、20～24h显著性高于应激前的水平(P

7、的表达量再次升高。在三个品系锦鲤之间，应激后O、20h，HSP70mRNA的相对表达量为黄金锦鲤>红白锦鲤>昭和锦鲤：应激后24h为红白锦鲤>黄金锦鲤>昭和锦鲤，其他时间三个品系间无显著性差异。结果表明：热应激下三个品系锦鲤非特异性免疫指标和HSP70IIl】王NA表达呈现不同的变化。热应激显著性地诱导了三个品系锦鲤HSP70mRNA的表达，诱导了黄金锦鲤和红自锦鲤血浆补体C3和AKP的合成，以及昭和锦鲤MPO的合成。结合实际生产中三个品系锦鲤抗病抗逆差异，我们可以推断热应激下诱导合成的HSP70

8、、C3、√U口和h仔O可能在机体抗逆过程中发挥着重要的作用。为进一步研究HSP70在鱼类抗应激反应中的作用机理，本研究采用5’m～CR和3’&虻E的方法克隆了锦鲤HSP70基因的全长序列，该序列长度为2289bp，编码“3个氨基酸。HSP70蛋白预测分子质量为70．46kD，理论等电点为5．47，整个蛋白带负电荷，在溶液中性质稳定。氨基酸序列分析显示，锦鲤HSP70具有HSP70家族的3个签名序列，以及HSP70家族细胞质特征基序EEvD和靠近C端的1个四肽序列GGMP。同源性分析