天然药物活性筛选考卷

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1、2012级硕士研究生期末考题(1)请列举5种转基因动物可用于老年痴呆药物研究，并简要说明它们的特征和应用范围（5分）iAPP转基因小鼠：病理特征：APP水平是正常鼠的6倍，Ab增高10-14倍，出现淀粉样血管病变，脂质氧化损伤，超氧化物歧化酶增加。行为学特征：9-10月龄小数空间辨识能力受损。应用范围：APP转基因鼠可用于抗老年痴呆中药的药效评价、活性筛选以及作用机制的研究。iiAPOE小鼠特征：该模型的转基因小鼠动脉壁损伤严重,内皮细胞出现受损、变质、脱落,细胞内连接不紧密。内皮下间隙增宽,内弹力膜破坏和消失；中膜平滑

2、肌结构破坏,合成型平滑肌较多。应用范围：可用于模拟小鼠老化过程中动脉粥样硬化进程，以及药物等因素对动脉粥样硬化进程的影响。iii神经组织特异表达CTF1转基因小鼠特征：转入的CTF1基因在脑组织的表达水平均高于同龄对照小鼠，CTF1转基因小鼠大小脑组织基本结构形态与正常小鼠对照没有异常。应用范围：用于研究CTF1生物学功能与老年痴呆等疾病发病机制的关系。iv快速老化SAM-P小鼠特征：老化迅速，且其海马甲醛含量随老龄化进程而增加。应用范围：研究内源性甲醛异常蓄积与记忆衰退关系，研究大鼠老化机制等。PS1-GFP小鼠特征：

3、高表达早老蛋白PS1应用范围：研究早老蛋白的结构和功能，了解其导致老年化的机制。(2)请比较细胞活性检测的几种方法的异同，包括MTT法、Hoechst染色法、细胞排染实验、细胞克隆形成实验，包括实验目的、原理、方法、优缺点等（10分）①MTT法实验目的：在肿瘤增值实验中，根据活细胞功能强弱，推测出活细胞相对数目或相对活力。原理：活细胞线粒体中脱氢酶能够代谢还原黄色的MTT，生成蓝紫色不溶于水的甲臜（Formazan）。甲臜的多少可以用酶标仪在570nm处进行测定。甲臜生成量与活细胞数成正比，因此可根据光密度OD值推测出活

4、细胞的数目。方法：细胞培养，传代，计数后接种，加药处理72小时后，加入MTT溶液(5mg/ml)，孵育2-4小时，弃去培养液，加入DMSO溶解生成的甲臜，用酶标仪测试OD值。优点：操作简单。缺点：只能测得活细胞相对数目或相对活力，不能测定细胞绝对数。②Hoechst染色法实验目的：通过活细胞及死亡细胞hoechst染色后颜色分布不同，对活细胞和死亡细胞分别计数，计算细胞存活率。实验原理：Hoeschst333258与DNA特异性结合发出蓝色荧光。活细胞成均匀的淡荧光，调亡细胞核或细胞质内则为强荧光的颗粒状物质。实验方法：

5、肿瘤细胞用Hoeschst333258染色后，在荧光显微镜下观察，记录死亡和活细胞数目。优点：不用加入染色剂，hoeschst与DNA结合后，在紫外激发下可自发光。缺点：计数过程复杂且耗时耗力。③细胞排染实验实验目的：根据死亡和活细胞染色颜色不同，计数死亡和正常细胞的数目，计算细胞存活率。原理：细胞损伤或死亡后细胞膜完整性被破坏，正常细胞排染，而死亡细胞染成蓝色。方法：细胞悬液加入酞酚蓝染色液混匀，用细胞计数板，分别计数活细胞（未染色）和死细胞（蓝色）数目。优点：测得活细胞的准确数目，缺点：数目多且一般要同一个人完成，计

6、数过程复杂且耗时耗力。④细胞克隆形成实验实验目的：根据细胞是否具有克隆能力，进行活细胞计数实验原理：具有克隆能力的细胞为活细胞，通过计数克隆团的数目，测定活细胞数目。试验方法：将药物处理后的细胞培养至克隆团出现时，终止培养，加药固定细胞，显微镜计数克隆团数目。优缺点：克隆测定则确切地反映了具有克隆能力的活存细胞数，并且适用于所有生长形式的细胞。缺点：操作繁琐，且培养时间较长。(1)请举例说明蛋白组学在心血管系统药物研究中的应用，标注参考文献。（5分）应用二向电泳、图像分析、质谱鉴定等蛋白质组学技术测定药物作用于心血管细胞

7、后引起表达量有显著变化的蛋白质，找到药物的作用蛋白，进一步探讨药物发挥作用的分子机制，为寻找心血管疾病的潜在靶标奠定基础。吕俊萍,王树人,马增春等.运用蛋白质组学技术研究TNF-α对血管内皮细胞的作用机制[J].中国病理生理杂志.2004(07)(2)请说明时间分辨荧光（TRF）和均相时间分辨荧光（HTRF）的技术原理和各自的优势。（5分）时间分辨荧光：以镧系元素(稀土离子：铕、钐、镝、铽）为复合物的荧光试剂，发射光衰减时间长，可以关闭激发光后再检测。因此杜绝了激发光的干扰，信号灵敏度和准确度比普通荧光试剂更高。优点：快

8、速（短时间特异性结合）高通量；高灵敏（nmol或pmol水平)；功能性筛选（激动或拮抗）；药效团分析（分子筛选）广泛应用于高通量筛选模型。均相时间分辨荧光HTRF®技术结合了荧光共振能量转移（FRET，FluorescenceResonanceEnergyTransfer）和时间分辨荧光（TRF''TimeResol