液相常见故障及技术问答

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1、目录1色谱柱使用寿命27最理想的流速2保留时间变化28键和的碳链3保留时间漂移29pH缓冲4不同色谱柱和不同批次之间的重现性30流动相组分5样品配制问题31柱子污染6峰形拖尾原因32方法验证7正相色谱33糖类分析中的双峰8系统体积，死体积，滞后体积34方法控制9梯度方法转移35流动相pH10系统堵塞36改善信噪比11色谱柱塔板数37过载12柱压38柱子的耐用性13峰面积变化39快速分析和柱压14鬼峰40反冲柱子15pH对保留时间的影响41选择性的改变16柱平衡42新方法17柱改性43倒峰18复杂的样品44麻烦，冗长乏味，费时19疏水坍塌45快速分析20基线噪音46L

2、C/MS的缓冲液21小孔柱47反相色谱中的碱性缓冲液22样品溶液48柱后衍生23梯度比例49梯度滞留体积24柱子保存50缓冲能力25离子对色谱51流速的变化与定量关系26反相填料的水解稳定性52极性物质的分析931色谱柱使用寿命问：我的色谱柱进样大概100针后峰形变差了，踏板数很低，怎么回事？答：100针确实很少，一般情况下使用时间会长很多的。首先我们要确认你的使用条件是不是导致色谱柱寿命下降的原因。两种基本情况：1在相同实验中以前使用的色谱柱寿命长很多2在本实验中用过的所有的色谱柱在使用相同次数后全部损坏如果是第一种情况，应该检查一下实验是否保持一致。样品的组成改

3、变了吗？样品中强吸收的污染物会破坏色谱柱的柱效。或者管路的密封圈是否完好？脱落的密封圈会堵塞色谱柱过滤器和填料的顶层，从而影响样品的分布。如果可以确认色谱条件没有变化，那么可以推测是柱床松动的原因。在实验室和运输过程中色谱柱剧烈的震动都会导致柱床松动。（色谱柱有没有掉到地上？）或者也有可能使生产商的问题。而且这种问题标准色谱柱检测中心是检测不出来的，只有在用过一段时间后才会显露出来。这种情况生产商会免费替换色谱柱。问：那些生产商真好，但是我的情况不是这样的。我的色谱柱总是用不了多长时间。有时候100针，有时候200针。200针还可以忍受，但是100针太差了。色谱柱开

4、销太大了，我该怎么办？答：我完全同意你所说的。我们必须要找到原因然后看看我们能做些什么。最大可能是样品中的成分吸附在色谱柱的顶端。可能是在流动相中不溶的沉淀物或者是强吸收的物质。随着进样的增加这些污染物在色谱柱顶端累积，阻止样品正常吸附和扩散。从而导致峰形变差。通常这种问题和柱压升高同时出现。问：嗯，可能就是这个原因。我应该怎么避免这种问题呢？答：有几种方法可以采用。一，采用合适的样品准备技术处理样品。用和分析柱相似的固相萃取柱进行固相萃取（SPE：solidphaseextraction）1效果很好。另外一种非常有效的方法是使用保护柱。保护柱是作为牺牲柱装在色谱柱

5、前使用的，出现问题的时候就会被替换掉。为了获得最好的分析效果，保护柱的填料和装填技术必须和分析柱一样。如果用不同品牌的填料就不能获得最佳的分析性能和保护作用。不要用大些的颗粒型号，大的颗粒或装填不好的预柱会因谱带93扩展而导致分离效果变差。问：使用预柱听起来不错，还有其他方法吗？答：还有其他一些方法，但是他们都有缺陷。我不提倡用那些可能溶解色谱柱顶端污染物的溶剂去冲洗柱子。很多情况下，这个方法是没有作用的。例如，如果沉积在色谱柱顶端的污染物是蛋白质，你冲洗的时候他们已经变性很久了，甚至可能交联在一起，变得难以溶解。此外，通常色谱柱是处于水解平衡状态，而每次冲洗都会除

6、掉水解键合相。因此，重复的冲洗柱子会加速柱子的老化。而且，冲洗后还要用流动相平衡柱子，如果是做离子对色谱的话会消耗大量的时间。另一个经常用的方法是反冲柱子。如果用和流动相不同的溶剂冲洗会产生和上面相同的问题。如果用流动相的话，需要很长的时间才能除去污染物，也有可能根本就没作用。同时，反冲柱子会削弱柱子。尽管现在的装填技术可以使柱子承受反冲，但是一般情况下不要采取这种做法。问：那么最好的建议就是使用预柱了？答：绝对是。预柱也没那么贵-一般随品牌和型号的不同价格在10$-50$之间，而他们所保护的柱子的价格是预柱的10倍左右啊。而且他们还可以避免其他来源的污染物的，这些

7、污染物更加难以发现。这些来源包括比如流动相中的灰尘，泵脱落的密封圈的碎片，或者从流动相吸附的污染物等等。其中有些难以对付，而保护柱就可以阻挡这些。问：还有其他缩短柱子使用寿命的原因吗？答：有的，但是只要你按照生产商的说明使用柱子的话一般很少发生。有一个可能就是流动相pH超出使用范围而导致的柱子坍塌。样品用强酸或强碱溶解的话也会发生另外，一些特别的柱子有特别注意的地方例如氨基柱可以和醛，酮反应。氨基柱在不含缓冲盐的水溶液中会显强碱性，分解部分硅胶。暴露在错误溶剂中的柱子也会发生坍塌。因为这些柱子是基于非常松散的结93构。他们是因颗粒之间的黏着而部分的结合在一起的。