植物病原真菌乙酰乳酸合成酶(als)及其抑制剂的研究

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1、加夕≥Z掌万方数据硕士学位论文论文题目⑧提交日期2014．06万方数据浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：叶绷寥签字脚如，严年6月0日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江太堂有权保

2、留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙堑太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者始叶朗彦导师签名．签字日期：如f甲年6月c>日签字日期：加垆年易月77日、占卫万方数据致谢时光匆匆如白驹过隙，转眼间我在浙江大学三年的求学生涯进入了尾声。在论文即将完成之际，我的心情无法平静，从论文的选题到论文的顺利完成，我接受过太多的帮助。在此，我要

3、对曾经指导、帮助和陪伴过我的师长、同学和朋友表示诚挚的感谢和由衷的敬意。我的论文是在导师陈卫良老师的悉心指导下完成的，从论文立题、实验构思、技术方案、实际操作到结果分析、论文撰写，无不倾注了导师的心血和智慧。三年来，陈老师在学习、科研和日常生活中的教诲和呵护，让我充满了感恩与感谢，您亲力亲为的工作作风及平易近人的待人风格将成为我今后工作和生活的一笔宝贵财富。在此，谨向我的导师陈卫良老师表示我最诚挚的谢意!我要感谢浙江大学给予我一个展现自我、超越自我的平台，感谢农业与生物技术学院和生物技术研究所三年来

4、对我的接纳和培养，感谢各位老师在学习和生活上对我的教育和关怀，感谢实验室同窗们对我的关心和帮助，感谢我的室友和同学们给予我的照顾和包容!是你们让我在研究生阶段能不断学习，不断求知，不断成长，度过了快乐而充实的三年时光。最后我要感谢二十多年来给予我无限关爱、理解和支持的父母、家人，是你们赋予我生命，给予我无私而伟大的爱，用你们的乐观积极感染了我，你们更是促使我努力奋斗拼搏的不竭动力!叶朝燕于浙江大学紫金港2014年6月万方数据浙江大学硕士学位论文摘要纹枯病菌(Rhizoctoniasolani)和禾谷

5、镰刀茵(Fusariumgraminearum)是禾本科作物的重要病原菌，其引起的水稻纹枯病等茵核病和小麦赤霉病等病害每年产生的损失巨大，危害十分严重。乙酰乳酸合成酶(Acetolactatesynth嬲e，ALS)是植物和微生物体内三种支链氨基酸生物合成过程中影响第一阶段的关键性酶，但并不存在于动物体内，其作为一种重要的除草剂靶标已被广泛证实和应用，但对于真菌ALS的研究甚少。本文旨在探索以ALS为靶标开发纹枯病菌和禾谷镰刀菌病害防治药剂的可能性。研究结果如下：1．选取两种植物病原真菌纹枯病菌、禾

6、谷镰刀菌和两种植物水稻(日本晴)、油菜(上海四月慢)为实验材料，进行ALS制备研究。在借鉴前人研究方法和经验的前提下，本试验从病原菌接种方法、接种时期、粗酶提取、酶活性测定等四个ALS活性鉴定的关键环节入手，总结了一套可用于真菌及植物ALS活性和离体化合物抑制的测定方法，为进行ALS活性特异性研究、ALS抑制化合物筛选研究等提供了良好的基础和借鉴。2．利用根据已有ALS抑制剂结构特点设计合成的31种嘧啶氧苄胺类化合物，以双草醚为对照，测定了100ppm浓度下它们对水稻、油菜、纹枯病菌和禾谷镰刀菌AL

7、S的抑制效果，结果发现同一化合物对不同ALS的作用效果存在差异：能抑制纹枯病菌ALS活性的有6种，能抑制禾谷镰刀菌ALS活性的有10种，能抑制水稻ALS活性的有12种，能抑制油菜ALS活性的有8种。仅对一种生物类型ALS产生抑制作用的有11种，能对两种生物类型ALS产生抑制作用的有4种，能对三种生物类型ALS产生抑制作用的有3种，对四种ALS均能产生抑制作用的有2种。能抑制多种生物类型的化合物对不同类型的ALS的抑制率存在差异。3．通过100ppm浓度下31种化合物对纹枯病菌和镰刀菌生长的抑制效果分

8、析，发现对纹枯病菌生长有较明显抑制作用的有27种，对禾谷镰刀菌生长有较明显抑制作用的有11种。比对待测化合物对两种真菌ALS和对菌丝生长的抑制率，发现两者之间存在差异。能抑制纹枯病菌生长而对其ALS无明显作用的化合物有22种，能抑制纹枯病菌ALS而对其菌丝生长无明显作用的有1种，对ALS和菌丝生长均能抑制的有5种；能抑制禾谷镰刀菌生长而对其ALS无明显作用的化合物有5种，能抑制禾谷镰刀菌ALS而对其菌丝生长无明显作用的有4种，均能抑制ALS和菌丝生长的有6种。4．对其