烟草炭疽病菌的分子检测与烟草品种抗病性研究

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1、山东农业大学硕士学位论文烟草炭疽病菌的分子检测与烟草品种抗病性研究姓名：贾玉申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：张广民20120620山东农业大学硕上学位论文中文摘要烟草是山东省重要的经济作物之一，该病害一直是影响烤烟优质稳产的重要限制因素。烟草炭疽病是烟草的重要的侵染性病害，此病在烟草各生育期皆可发生，但以苗期发生普遍而严重。幼苗叶片病斑密布，严重发病时往往使整片烟苗毁掉。在防治烟草炭疽病方面，目前在生产上主要采用农业防治和药剂防治。缺乏特效的药剂和抗性品种，本研究对山东省主产烟区采集到得烟草炭疽病菌进行了分离鉴定和

2、分子生物学检测，并对17个烟草种质资源进行了烟草炭疽病的抗性鉴定。为烟草炭疽病的诊断和防治提供了理论基础，为抗病育种的了提供科学依据。本研究主要得到以下结果：1．烟草炭疽病的病原鉴定：通过症状观察、病原物的分离、致病性测定、形态学观察和5．8SrDNA．ITS序列分析，我们鉴定出山东主产烟区烟草炭疽病病原菌为毁灭炭疽菌(Colletotrichumdestructivum0’Gara)。病原菌菌落为圆形，起初为灰白色，后期颜色稍深，分生孢子盘黑褐色，着生身生孢子梗和刚毛；刚毛很褐色，散生，有分割；分生孢子为长圆筒形两端钝圆，单

3、胞，无色。根据ITSrDNA构筑供试菌株与其他炭疽菌属真系统进化树中与毁灭炭疽菌聚于同一分支。2．建立了一套快速、高效的检测鉴定烟草炭疽病菌的PCR方法。本研究以采自山东烟区的烟草炭疽病菌为目的菌株，提取基因组DNA，设计了一对特异引物Col／C02用于Cdestructivum的分子检测。利用该引物对包括Cdestructivum在内的13个烟草病原菌菌株的基因组DNA进行PCR扩增，结果表明：只有Cdestructivum能扩增到特异性条带，其它菌株及阴性对照均无扩增产物。对烟草组织和土壤的检测结果也表明，该对引物能特异性

4、的检测到Cdestructivumm基因组DNA的存在。该引物对Cdestructivum基因组DNA检测的灵敏度为0．01pg／p,L。3．对来自田间的土壤样品进行了实际检测，证明了所建立的PCR检测体系是稳定可靠的。分别检测体系对来自山东蒙阴、沂水、莒县等地8个田间土壤样品进行实际检测，结果与田间发病情况基本一致，证明所建立的PCR检测体系是稳定可靠的．4．通过采用不同的接种浓度和接种苗龄等对烟草品种对烟草炭疽病的苗期抗病性进行了测定，对其表现进行比较，筛选出一套适用于烟草苗期的快速准确的抗病性鉴定方法。烟草炭疽病苗期抗病

5、性鉴定，采用1x108efu／mL的病原菌悬浮液，在苗龄六周期进行喷雾接种，能较好地表现发病情况，接种后第9天调查发病情况，能够反映不同材料对炭疽病的抗病性差异。烟草壅堕堕堕堕坌王丝塑兰塑兰曼登垫塑丝塑壅一——5．通过17个烟草品种对炭疽病的抗病性鉴定结果表明，不同烟草品种对炭疽病的抗病性有一定的差异。17份材料中没有高抗和免疫品种，41．2％的烟草品种表现中抗，47．1％表现中感，11．7％高感。关键词：烟草炭疽病，病原鉴定，PCR检测，抗性Ⅱ山东农业大学硕{二学位论文MoleculardetectionofColletot

6、richumdestructivumandResistanceReationontobaccotoCDestructivumAbstactTobaccoisallimportanteconomiccropinShandongprovince，andthediseasehasbeenalimitingfactorofFlue-curedTobacco’Squality．Anthracnoseoftobacco，asallimportantinfectiousdisease，callOCCuratdifferentgrowthst

7、agesoftobbcco，Especiallyinseedlingoccurrence．It’Samajordestructivediseaseintobaccoproduction，andhasbroughthugelosses．thepreventionandcontrolofAnthracnoseoftobaccoinproductioncurrentlyismainlybasedonagriculturalcontrolandchemicalcontrol，buttheeffectWasnotsignificant，

8、thelackofeffectsofpharmaceuticalandresistantvarieties．onlytorelyonresistantvarietiesControloftobaccobacterialwiltinfestationisthefundament