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1、转录因子GATA一3与T一bet表达失衡在复苏后急性肺损伤中作用【摘要】目的探讨转录因子GATA-3和T-bet的表达失衡是否参与了猪心肺复苏后的急性肺损伤机制。方法26头猪随机(随机数字法)分为假手术组(SHAM)(6只)、复苏12h组和复苏24h组(各10只)。建立室颤8min小型猪模型；用流式细胞术检测猪外周血淋巴细胞(PBL)中CD3+、CD4+和CD8+淋巴细胞亚群的分布；采用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测血浆中白细胞介素-4(IL-4),肿瘤坏死因子a(TNF-a)和干扰素Y(INF-Y)的含量；采用We
2、stern-blot法检测肺组织GATA-3和T-bet的蛋白表达；用实时荧光PCR法定量肺组织GATA-3和T-betmRNA水平。结果复苏组小猪发生严重肺组织细胞损伤，在复苏后的12h和24h,猪血清中CD4+细胞的比例(28,4±2,3)%,(24,1±1,6)%明显低于假手术组(48,4±2,9)%,(51,1±5,4)%；CD4+/CD8+(1,7±0,9),(1,5±1,0)也较假手术组明显减低(2,5±1,3),(2,7±1,1)(P[Keywords】Cardiopulmonaryresuscitatio
3、n；Acutelunginjury；Thl/Th2imbalance；Immunedysfunction；GATA-3；T-bet心搏骤停后，全身性缺血导致各组织器官均出现严重的缺血缺氧，并伴有严重酸中毒，从而导致组织细胞的能量代谢障碍、蛋白变性、细胞损伤甚至死亡［1］。当炎性反应过度，炎症介质产生异常，机体反应过激、失控，这种过度的全身炎症反应可累及到肺引起急性肺损伤(acutelunginjury,ALI)［2］,进而发展为急性呼吸窘迫综合征［3］。目前考虑心肺复苏(CPR)后的ALI主要与氧自由基、缺血-再灌注和凋
4、亡等有一定的关系［4-6］。辅助性T细胞主要有T淋巴细胞亚群1和2(Thl/Th2),Thl细胞产生Y-干扰素、IL-12和肿瘤坏死因子B；Th2细胞产生IL-4、IL-5、IL-13等细胞因子。前者与细胞免疫相关，而后者则参与体液免疫。在正常情况下，机体Thl/Th2细胞处于动态平衡状态，维持机体正常的免疫功能［7］。转录因子T-bet是Thl细胞特异的转录因子，参与Thl的分化和转化。而GATA-3则在Th2细胞分化过程中起关键作用，它是所有Th2型细胞因子转录所必需的，因而转录因子T-bet和GATA-3最终决定了
5、Thl与Th2的分化方向。心搏骤停一旦发生，可理解成一种超常的应激反应，必将引起转录因子T-bet和GATA-3的失衡，从而导致Thl/Th2的失衡，出现Th2型细胞因子发生瀑布式级联反应，引发和促进ARDS及多器官功能衰竭［8］。目前，有关T-bet和GATA-3的失衡进一步导致的肺免疫功能障碍在CPR后ALI中的作用在国内外并没有报道。本研究主要是建立小型猪室颤8min模型，复苏成功后通过检测小型猪的血清中IL-4、TNF-a和INF-Y的水平和肺组织的T-bet和GATA-3蛋白表达以及mRNA水平，从而证实心肺复
6、苏后肺组织细胞出现由转录因子GATA-3和T-bet介导的Thl/Th2失衡导致的免疫功能障碍，其机制可能是导致复苏后ALI的主要机制之一。1材料与方法1,1实验试剂与设备GATA-3抗体购自abll3519；AbeamBiotechnology,UK；T-bet抗体购自sc-21003；SantaCruzBiotechnology,USAoFITC标记的CD8单克隆抗体(Mouseantipig,IgGl)、PE/cy5标记的CD4单克隆抗体(Mouseantipig,IgG2b)购自尚柏生物技术有限公司，IL-4C6
7、R019),TNF-a(6R071)和INF-Y(6R082)试剂购自SantaCruz公司，实时荧光定量PCR检测试剂盒购自杭州博日科技有限公司，Q-CPRTMHeartStartMRx监护仪/除颤器(荷兰飞利浦医疗系统公司提供)，GY-600A医用程控刺激仪购自中国开封华南仪器有限公司，HPMl165多功能监测仪(美国惠普公司提供),Line-gene荧光定量PCR检测系统(杭州博日科技有限公司提供)。1,2实验动物分组实验用近交系五指山小型猪(WZSPInbred"sMinipig)26头，雄性，月龄为10〜12个
8、月，体质量为（30±2）kg,由中国农业科学院畜牧兽医研究所提供。实验动物随机（随机数字法）分为假手术组（6头），复苏12h组（10头）和复苏24h组（10头）。1,3室颤动物模型的制备术前晚上禁食，自由饮水。肌注氯胺酮（0,5mg/kg）,联合耳缘静脉注射丙泊酚2mg/kg诱导麻醉，瑞芬太尼注射液首剂0,25mg静
