抗菌肽衍生物的杀精效果研究

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1、北京协和医学院r清华大学医学部．J硕士研究生学位论文硕士学位论文抗菌肽衍生物的杀精效果研究所院：北京协和医学院姓名：导师：导师小组：学科专业：研究方向：完成日期：学校代码：10023学号：$2011020005国家人口计生委科学技术研究所张尉于和鸣研究员侯丽助理研究员王慧萍副研究员生物化学与分子生物学生殖药理2014年4月北京协和医学院f清华大学医学却J硕士研究生学位论文目录㈣烘罂摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

2、．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8目Ⅱ青⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131．精液样本的收集⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132．精子计数及活力评价⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯133．药品制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯134．体外杀精实验⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．135．瞬间杀精效果(ECloo)的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．146．细胞毒性实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯157．杀精抗菌肽时间．浓度依赖性实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯178．动物抗生育实验初探⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯179．抗菌肽杀精机制初探(HOS．EG实验)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1810．抗菌实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．19实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2l

4、1．体外杀精效果的筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。212．瞬间杀精效果(ECaoo)的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．223．细胞毒性结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．234．杀精抗菌肽的时间．浓度依赖性测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯255。抗生育实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．276．抗菌肽杀精机制初探结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．287．抗菌实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．29讨论⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．30参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．35文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．39北京*和医学院f清华大学医学部．)硕士研究生学位论文附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．46致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．522北京协和医学院f清华大学匹学部J硕士研究生学位论文抗菌肽衍生物的杀精效果研究摘要研究背景：体外杀精剂是控制生育和避孕的有效手段，其中壬苯醇醚-9(Nonoxin01．

6、9，N．9)因其具有强大的杀精效果而成为广泛接受的表面活性剂类杀精剂，已经在美国和其它一些国家使用超过了30年。作为一种有效的杀精避孕阴道外用生物制剂，除了拥有快速有效的杀精避孕性质之外，安全低毒也非常重要。但近年来有研究表明，N．9存在安全隐患，长期反复使用可能会对阴道上皮细胞造成损伤，所以尽快研制新型安全的杀精避孕剂已迫在眉睫。抗菌肽(Antimicrobialpeptides)是广泛存在于生物体内的一类抵抗外源性病原微生物致病作用的防御性小分子多肽(分子质量<10ku)，是宿主固有免疫系统的重要组

7、成部分。每种抗菌肽都有其特定的抗菌谱，部分抗菌肽还兼具杀精子作用。两栖动物蛙类的皮肤分泌物中含有丰富的抗菌多肽，在抗菌、抗肿瘤、抗病毒和杀精等方面都展现出了强大的功能，并己在农业及临床等方面有所应用。目前，国外关于杀精抗茵肽的报道如Magainin、Dermaseptins、Nisin和Subtilosin等几种抗菌肽都显示出较强的体外杀精效果，如800"---1000mg／LMagainin20s就能制动(immobilization)猴的精子(浓度为60×106／mL～80×108／mL)，值得注意

8、的是，Magainin在最小杀精浓度时，未对红细胞和阴道粘膜细胞产生毒性，显示出较高的安全性。因此，抗菌肽成为近年来国内外研发的热点。其中线性阳离子多肽Maximin是赖仞课题组最早从中国大蹼铃蟾(Bombinamaxima)皮肤中分离提取的具有自主知识产权的先导化合物，特别是Maximin和同浓度的Magainin具有相似的精子制动活性，故成为本实验杀精分析首选抗菌肽。本文通过对19种抗菌肽Maximin衍生物(M1～M19)进行体外杀精