2010病毒遗传分析ppt培训课件

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1、第3章　病毒遗传分析总论第一节　T4噬菌体第二节λ噬菌体第三节　反转录病毒病毒的基因组结构总论病毒的复制过程T4噬菌体对E.coli的侵染病毒复制的模板链第一节　T4噬菌体T4噬菌体的DNA是线性排列的，可是它的连锁图却是环状的。1、末端冗余:染色体的末端是相同的，即它们是冗余的（如abcdefg……wxyzabc）。2、环状排列:每个染色体的末端是不同的如一个染色体可能是abcdefg……wxyzabc，而另一个染色体的顺序可能是defghi……xyzabcdef等。末端冗余ab的亲本病毒是怎样产生cd、de、ef等末端冗余的

2、子代的呢？DNA复制和子代DNA分子包装到T2和T4噬菌体头部的特殊方式所决定的。在感染初期，线状的亲代DNA分子经过几轮DNA复制产生单位长度再加末端重复的子代分子，接着子代分子的重复末端之间重组，形成了很长的T2或T4基因组多连体(concatemers)，即串连重复顺序，它们自身再进行复制而重组形成更长的多连体；感染后期，子代噬菌体的头部蛋白将这些多连体DNA分子包装起来，直到完全装满为止，每个噬菌体颗粒能包装多长的DNA分子取决于壳体本身，通常填滿头部所需的DNA超过从a到z的一套基因组，对在z后面的基因仍有空间可以包装

3、，于是又继续包装基因a、b、c，至头部被装满时将DNA切断，由此可以看到这个病毒粒子是基因a、b、c冗余的，下一个病毒粒子将接从d起始的DNA分子开始包装至c，然后继续到d、e、f，这个病毒是d、e、f冗余的，再下一个病毒粒子从g开始包装，冗余g、h、i基因等等。这种头部满装机制(headfulmechanism)的特殊DNA包装方式就解释了噬菌体颗粒中基因的末端冗余和基因次序的环状排列：所有的子代病毒都携带有冗余DNA分子，及这种分子是不同基因冗余的。证据一证据二有关噬菌体感染的研究方法1、噬菌斑(plague)噬菌体感染宿主

4、细菌以后在含受体菌的涂布平板上形成的肉眼可见的透明圈（大小，形状，透明度和边缘）双层平板法分离细菌病毒（噬菌体）的技术（噬菌斑）用单层细胞进行培养感染噬菌体2、一步生长曲线的实验(one-step-growthexperiment)定量描述烈性噬菌体生长规律的实验曲线称为一步生长曲线。该曲线可以用来确定噬菌体的潜伏期、裂解期和裂解量。病毒复制的一步生长曲线3、单菌释放实验(singleburstexperiment)用来定量描述单个细菌释放噬菌体的数量４、重组测验(recombinationtest)噬菌体突变型E.coliB５

5、、互补测验(complementarytest)两个突变株互相满足在寄主K中进行复制所缺少的因素,从而都能复制,并在复制过程中发生基因重组。６、缺失作图(deletionmap)缺失定位是一种简便有效的定位方法。利用一系列缺失突变型(已知)作为工具，把所要测定的突变型和这一系列缺失突变型分别进行重组测验，凡是能和某一缺失突变型进行重组的，它的位置一定不在缺失范围内，凡是不能重组的，它的位置一定在缺失范围内，根据与一系列的缺失突变型进行重组的结果，可以精确地确定某待测突变型的位置。第二节λ噬菌体一、噬菌体基因组与原噬菌体(一)

6、噬菌体的基因组：由48500bp构成基因分类7个（必需基因：相邻）head11个（必需基因：相邻）tail噬菌斑形成必需的基因复制所需基因：O、P裂解、释放所需基因：S、R基因正调控基因：N、Q附着区：att；专一性重组所必需：int、xis噬菌斑形成非必需基因溶源化所需：CI、CII、CIII重组所必需：exo、redLambda噬菌体的遗传图谱λ噬菌体基因组的结构粘性末端寄主细胞内环化COS位点5'3'3'5'12个核苷酸12个核苷酸环化状态下,λ噬菌体DNA分子的长度为48,502碱基对例如，头部、尾部、复制及重组四大功能

7、的基因，各自聚集成四个特殊的基因簇。5'3'AWBCD….J..att..int..xisNOPSR左侧区中间区右侧区(二)、原噬菌体与合子诱导1、原噬菌体：2、合子诱导：Hfr(λ)F-→受体菌裂解(λ进入F-)Hfr(λ)[F因子整合、λ原噬菌体]，F-[无F]b+原点λd+c+a+3、λ整合部位的确定(三)、原噬菌体的插入与切除1、噬菌体的插入与原噬菌体正常切除2、原噬菌体的异常切除（1）转导噬菌体：带有细菌基因的噬菌体（2）d转导噬菌体的特点——局限性转导3、dgal(左臂缺失)位点特异性重组E.coliat

8、tB位于bio基因和gal基因之间B-GCTTTTTTATACTAA-B’-11+11λattPP-GCTTTTTTATACTAA-P’-152+82-GCTTTTTTATACTAA--CGAAAAATATGATT--GCTTTTTTATACTAA--CGAAA