兔vx2肝癌放疗后mr扩散加权成像与bcl-2基因相关性研究

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1、广州医学院硕士学位论文兔VX2肝癌放疗后MR扩散加权成像与Bcl一2基因相关性研究肿瘤的放疗结果产生一定的影响【lo’111。本实验将探讨VX2兔肝癌放疗前的DWI成像特征，三维立体定向适形放疗后DWI成像特征、Bcl．2基因表达情况及其两者的相关性。材料与方法技术路线简图制作动物模型40．i_L2周后ti'MR检褒弱多l放疗l'2强对照翰机分为四组，分期予放疗后1天、5天、10天、15天行MR捡盔看处死8cI-2簇园捡潮数据分析一、建立动物模型新西兰大白兔42只(由广东省医学动物中心提供)，雌雄各半，体重1．5．2．0kg，平均体重

2、1．7kg，荷瘤兔1只(广西医科大学惠赠)。先用速眠新(0．2ml／kg)麻醉荷瘤兔后，在无菌条件下暴露VX2瘤灶，剪取边缘部分灰白色鱼肉样新鲜肿瘤组织，用生理盐水反复清洗并剔除肿瘤表面的血液和坏死成分后，移置盛有RMPI．1640培养液的平皿中，瘤体分成两部分，一部分用眼科剪剪碎成1．2mm大小作为备用，另一部分用匀浆器研磨成细胞悬液，与RMPI．1640细胞培养液混悬约106～108个瘤细肋lllm3。将40只新西兰大白兔按0．2ml／kg体重肌肉注射速眠新麻醉后，随机分为两一8一广州医学院硕士学位论文兔VX2肝癌放疗后MR扩散加

3、权成像与Bcl-2基因相关性研究组，将实验兔仰卧，四肢固定，上腹部剃毛，按外科无菌操作程序，对手术区皮肤进行消毒，铺无菌巾，于剑突下约10彻处沿腹白线作一长约30mlTl的正中切口，逐层入腹，暴露肝脏左叶。第一组用食指与拇指轻柔固定肝脏，在距其下缘约10,-一15nllTl处用眼科镊取备用的瘤组织块沿肝包膜下向肝实质中央斜插约10mm深，然后抽出眼科镊，用明胶海绵压迫止血6s左右。第二组向肝左叶注射0．3ml细胞悬液，用明胶海绵压迫20s左右。32只种植1个部位，8只种植2个部位。向腹腔内滴注4万单位硫酸庆大霉素注射液以防感染，再依次

4、缝合切口，并肌注青霉素4万单位。术后送回动物房饲养，前三天肌注庆大霉素、青霉素各4万单位。将细胞悬液注射于另外2只大白兔的双侧腹股沟内，每侧0．3ml，以供传代用。成功建立40只兔VX2肝癌模型，2周后行MR扫描，观察肿瘤大小，待肿瘤直径_>10mm时，随机抽取28只瘤兔麻醉后送入肿瘤放疗中心，行三维立体定向适形放疗。二、三维立体定向适形放疗方法28只瘤兔均在PhilipACQSimCT模拟机定位下以3mm层厚靶区连续扫描，将定位CT图像通过局域网输送到三维治疗计划设计系统(Pinnacle7．6版本)，勾画出靶区，靶体积的定义：放疗

5、计划CT上的可见肿瘤为大体肿瘤体积(grosstumorvolume，GTV)，勾画GTV前参考MR图像，确定计划靶体积(planningtargetvolume，PTV)，由物理师筛选射线入射方向，调整剂量分布，使90％等剂量曲线包绕100％PTV剂量体积，参照文献【121放疗剂量为10"-，20Gy，单次放疗，用EleketaPrecise医用直线加速器实现放疗计划，采用6MVX线。放疗后送回动物中心饲养。三、分组及后期处理成功行放疗后，将放疗后28只兔随机分成四组，另12只作为对照组，随机分配到各组中，放疗后不同时间点1天、5天

6、、10天、15天分别进行MR扫描。检查完毕处死动物，取标本迅速至于液氮中保存行Rt．PCR法测定Bcl．2凋亡基因的表达情况。一9一广州医学院硕士学位论文兔VX2肝癌放疗后MR扩散加权成像与Bel—2基冈相关性研究四、MR扫描方法及图像处理用速眠新按0．2ml／kg体重深度麻醉兔后，使用自制腹带加压固定，采用Philips1．5T超导磁共振扫描仪，使用膝关节线圈，采用呼吸门控技术依次行常规T2WI(横断、冠状、矢状位)、DWI扫描，DWI序列采用SE—EPI序列(参数见表一)，采用SENSE技术，缩减因子(reductiofactor

7、)取值为2。扫描参数：层厚2mm，各向同性，NSA4，视野(FOV)I50mm，矩阵256x256，梯度因子b值分别取100、200、300、400、500、600s／mm2，扫描总时间约为4分钟。表一不同b值DW!扫描参数表在不同b值的ADC图上，分别测量正常肝脏、VX2肿瘤感兴趣区(regionofinterest，ROI)的表面扩散系数(apparentdiffusioncoefficient，ADC)值，正常肝脏的ROI面积约50mm2，VX2瘤的ROI面积取肿瘤最大面积的80％，各取3次取平均值。以ADC值为指标评价兔正常肝

8、脏与VX2瘤及不同b值DWI序列的组间差异，分别计算放疗后兔VX2瘤体、对照组兔VX2瘤体的ADC值与肝脏ADC值比率(VX2肿瘤／肝脏)。五、Bel．2基因检测组织块经TRIZOL法抽提总RNA后，针对Bcl．2基因设