seldi蛋白芯片技术筛选肝癌血清标志蛋白研究

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1、SELDI蛋白芯片技术筛选肝细胞性肝痛m清标志蛋白的研究2005级硕士研究生学位论文．二‘JL．--JL刖吾肝癌是一种常见的恶性肿瘤，其中肝细胞性肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)在我国占原发性肝癌的90％。肝癌的恶性度极高，发生发展迅速，病人预后差。流行病学资料显示，全球肝癌发病率在各种癌症中位于第八位，病死率位于第四位，每年约有50一100万人因肝癌致死。与70年代比较，中国肝癌死亡率水平有了较大幅度的增高，与世界其他国家相比，我国肝癌死亡率处于较高水平，位居各国肝癌死亡率之首⋯，其中

2、90％是船V感染者经过15—25年的慢性过程转化而来的，且表面抗原(HBsAg)阳性的持续携带者比非HBsAg阳性者其HCC的发生率高100倍乜3。由于HCC患者早期常无明显症状，发现时已属中、晚期，患者预后差。因此，迫切需要探索一种快速、简单、灵敏度高、特异性好的早期诊断方法。随着不同时期新的诊断方法问世，肝癌的诊断已从30年代的“死后诊断”进展到“临床诊断"以及70年代的“亚临床诊断”。70年代初，甲胎蛋白的临床应用使肝癌诊断向前迈进一大步。80年代实时超声、计算机断层摄影(CT)、磁共振成像(MRI)等新的定位

3、诊断方法问世使肝癌的诊断更日臻完美，使得亚临床期诊断提高到1cm肝癌水平，临床期肝癌的诊断更为准确。常规的肝癌诊断主要为：血清AFP检测，肝脏B超检查或核磁共振检查，肝动脉造影，肝穿刺活组织检查，外科手术活检或冰冻切片检查等。目前肝癌的早期诊断主要是以血清AFP的测定结合影像学检查为主。其中AFP已成为最有价值的肝癌标志物，多年以来一直作为诊断肝癌的重要参考依据，并己成为国际上肝癌早期诊断较好的指标。但是30％一40％的肝癌病人的AFP阴性∞’SELDI蛋白芯片技术筛选盯细胞性肝癌血清标志蛋白的研究2005级硕士研究

4、生学位论文钊，常使临床的早期诊断遇到这两种情况：一是APP浓度高于正常(20ug／L)但不达到诊断肝癌的标准(400ug／L)，如若影像诊断未有肝内占位性病变发现，则可能被视为肝病活动，长期门诊随访，而坐失根治良机。二是AFP阴性病例，实时超声出现可疑占位性病变而无法定性。再作CT、磁共振成像、放射性核素扫描等等，每每众说纷纭，结论不一，因而延误了肝癌的早期诊断。为此近年来提倡多种标志物联合检测以提高检测的灵敏度和特异度璐3，但多项指标组合在提高肝癌诊断敏感性的同时，降低了其特异性及准确性∞、71，因此多种标志物联合

5、检测的应用也具有了一定的局限性。因此，寻找有效的肿瘤标志物用于癌变机理研究、药物靶标的设计、疾病的早期诊断及高危人群的筛查成为肝癌研究的当务之急。人类基因组序列草图完成后，生命科学进入了“后基因组时代”，研究的重点转向了对复杂的蛋白质功能的研究。蛋白质是基因表达的最终产物，器官组织的生理状态变化会引起血清蛋白质组的改变，因此对蛋白质和蛋白质组学进行研究可以直接获取疾病的特征性标志，同时通过研究人们认识到由于人血清是一个蛋白质相当丰富并不断变化的系统，单一的血清肿瘤标记物难以真正反溯到相关的细胞组织，而发现一组与特定组

6、织癌变相关的血清蛋白质(多参数标记物)则是更有效的途径，这也就是所谓的“癌症指纹川踟(Cancersignature)，而高通量的表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI—TOF_MS)的出现加速了开展发现“癌症指纹”的研究。目前利用SELDI技术发现肿瘤的特殊生物学标记，对于肿瘤的早期诊断具有独特的优势和重要的意义，在多种肿瘤的研究中显示出良好的应用前景∞“钊，其中对卵巢癌的敏感性达100％，已获美国FDA批准用于临床n朝。SELDl蛋白：卷片技术筛选肝细胞性肝癌血清标志蛋白的研究2005级硕二l：研究生学

7、位论文表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI—TOF-MS)是在MALDI—TOF_MS基础上改良的，其通过特殊的增强表面式芯片直接捕获待测样品中的蛋白质分子，然后经激光解吸离子化一飞行时间一质谱测定被捕获的蛋白质的质量和电荷比(SELDI技术的原理图见图1)。SELDI技术应用的蛋白质芯片分为生物型芯片和化学型芯片。生物型芯片是在一块微小的固体表面上结合抗体或抗原、DNA、酶、受体，作为摄取抗原或抗体、DNA结合蛋白、底物、配体等特异蛋白；化学型芯片主要根据蛋白质的疏水性、亲水性、离子的特性分为疏水型芯片、亲

8、水性芯片、弱阳离子交换型芯片、强阴离子交换型芯片等，这些化学型芯片可以非特异或特异性结合蛋白质。该技术主要特点为可直接在芯片上进行样品前处理，芯片上所设计的不同特性化合物可与样本中特定种类的蛋白质相结合，直接串联飞行时间一质谱仪进行分析。所出现的质谱图重复性很高，可用于不同来源的样品比较。特别适用于检测质量小于20KDa的蛋白质分子，如细胞因子