哈茨木霉h-13形态及生理特征的研究

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1、分类号：Q：塑密级：酱适单位代码：一!Q3盟——学号：S丝QZ!Q!1225名微雇业大学学位论文哈茨木霉H．13形态及生理特征的研究StudyonMorphologyandPhysiologicaICharacteristicsofTrichodermaharziahumH一13研究生：韭友维指导教师：蓥童科教援合作指导教师：申请学位门类级别：理堂亟±专业名称：一生物物理堂一一研究方向：生物塑型毡堂所在学院：生金型堂堂瞳答辩委员会主席：2007年6月摘要木霉菌是一种广泛存在于土壤、植物根际和叶面的腐生型真菌，对多种植物病原真菌具有

2、拮抗作用。因而被当作一种生防菌种进行使用，并引起了众多微生物学家和植物病害研究者的高度重视。本项研究采用对比研究法，与对照菌株相比，将试验菌株培养后，从菌落，菌丝体，细胞形态等宏观层次阐明主要差异；从菌物对环境物质吸收、转运及利用，阐明对环境物质选择性吸收的可调控性；从对目的物合成种类与星的分析，阐明相关酶基因表达能力与效果变化规律；为生产实践提供技术参数。文中采用将试验菌株与原菌株分别点接在PDA培养基平板上，30℃下培养3天，肉眼观察菌物呈圆斑状，菌斑上的菌丝大部分呈白色，菌斑的局部有色素合成，呈现淡黄色。在液体培养基中，木霉

3、菌丝相互缠绕在～起，呈球状，显淡黄色。普通光学显微镜观察表明，木霉菌丝纵横交错，呈网络状。扫描电镜观察表明，对照菌株孢子基本呈圆形，表面粗糙，中间略有凹陷，试验菌株孢子表面光滑，棱角清晰，呈馒头状，有的甚至呈方形，中问略有凹陷。通过对发酵液残留糖含量的测定，试验菌株培养液中还原糖的浓度明显低于对照菌株，说明试验菌株对碳源的吸收利用速率明显要高于对照菌株。在进行产几丁质酶和纤维素酶的试验中，分别以胶态几丁质和羧甲基纤维素钠作为相应的产酶培养基中的唯一碳源，通过测定几丁质酶的酶活以及纤维索酶水解圈的大小，得出离子束诱变后，试验菌株的产

4、酶基因的表达比对照菌株有了较大的增强，试验菌株几丁质酶的酶活最高可达0．292U／ml，而对照菌株酶活只有0．228U／m1故产几丁质酶最佳培养基是在原培养基中添加1．O％的酵母粉：纤维素酶也是木霉抑菌的又一酶制剂，文中采用羧甲基纤维素钠(CMC)作为唯一碳源的产纤维素酶培养基，以CMC水解圈的大小来衡量纤维素酶的酶活，则试验菌株的水解圈的直径偏高于对照菌株。通过上述试验表明，离子束对木霉的生物学特性改造产生积极影响，经20代转接，木霉的遗传稳定性未见明显衰退，提高了木霉对环境物质吸收转化利用的选择性；发现几丁质酶、纤维素酶量与活

5、性均有定向提高。一总结上述，，离子柬诱变在生防菌株木霉的改良上起着重大的作用，改良后的菌株对外界环境的适应性比对照菌株提高，遗传性状较对照菌株稳定，试验菌株对酸碱、高温及渗透压的耐受性增强，所有这些特点表明改造后的菌株更适合用作生防菌株。关键词：木霉，几丁质酶，纤维素酶，试验菌株，对照菌株AbstractTfichodermawhichexistsinthesoil．plantrootzoneandleafsurfacewidespreadisatypicalrotfungianditisartantagonisticbacter

6、iumofAgaricusspa：．So妇1,wndistresspathogensTrichodermausedasbiocontrofactorsandattractsmuchattentionofmanymierobiologistsand1eaiTlersonplantdiseases．Contrastingmethodwasmadeuseofinthisexperiment．Afterculturingthemutantstrain。maindifferenceswereconcludedbycolony，mycelia

7、andeellmorphologyincontrasttothewildstrain．Fromtheassimilation，transportationandutilizationofnutrientsmadebythemutantstrain，theresultWasconcludedthattheassimilationfornutrientWascontrollabIe．Fromthekindsandquantityoftargetproducts，aconclusionwasconcludedthatexpression

8、ofsomeenzymegeneswasenhanced．Inthistest．inoculatedthemutantstrainandthewildstrainonthePDAmediumplaterespectively．culturingun