两个棉花(gossypium hirsutum)lim蛋白调控肌动蛋白细胞骨架及其在花药发育中的功能研究

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1、分类号——UDC密级——编号——茸中唯j『鬣夫等硕士学位论文学位申请人姓名：奎兰申请学位学生类别：全旦劐塑±申请学位学科专业：垒堑丝鲎鱼佥至垒堑鲎指导教师姓名：圭至窒丝筮掣鎏⑨淼‰。硕士学位论文两个棉花(国ss即／册办／厂s“亡厕LIM蛋白调控肌动蛋白细胞骨架及其在花药发育中的功能研究论文作者：李兰指导教师：李学宝教授学科专业：生物化学与分子生物学研究方向：分子遗传学华中师范大学生命科学学院2014年5月⑧硕士学位论文MASTER’STHESlS’I'wocotton(6切聊Z最册庞Z坶以f以刀1)LIMproteinsregulateF—actincyto

2、skeletonandfhnctioninantherdeVelopmentAThesisS1lbmittedinPnrtiQlF"坼llment《theReqtlireme班FortheM．sDe酽einBiochemist秽Q耐MoteculnrBiolo斟ByLiLanPostgraduateProgramCoUegeofLifeScienceCentralChinaNormaIUniVersitySupervisor：LiXuebaoAcademicTitle：PmfessorSi印an】reX洲鲫厶‘ApproVedMay，2014⑧硕士学位论文M

3、ASTER’STHES【S华中师范大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。曩以，作者签名：气夕日期砂夕年6月弓日学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解华中师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属华中师范大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交

4、论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后遵守此规定)保密论文注释：本学位论文属于保密，在——年解密后适用本授权书。非保密论文注释：本学位论文不属于保密范围，适用本授权书。作者签名：菇芬日期：沙，饵彩月弓日导师魏名豫老，日期0D缈年∥月7日本人已经认真阅读“CALIS高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交“cALIs高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按“章程”中的规定享受相关权益。回童途塞握童卮进卮；旦主生；旦

5、二生；旦三生筮壶!储戡考易日期洲驴年6月弓日导师签名：／害～宇之，日期：州绰歹月弓日⑧硕士学位论文MASTER’STHESIS摘要肌动蛋白(actin)在真核生物的生命活动中占据重要地位，它不仅是构建细胞骨架所必需的物质，而且也参与了真核生物生长发育中的很多过程。一旦肌动蛋白细胞骨架的动力学机制遭到破坏，真核生物的生命活动就会出现不同程度的畸变。在细胞中，一系列的肌动蛋白结合蛋白(ABP)参与了维持肌动蛋白动力学及其功能多样性。LIM蛋白作为一类重要的肌动蛋白结合蛋白，在很多植物中均有报道。它参与调控肌动蛋白丝的装配与解聚过程，包括成核、切割和成帽等。在棉花

6、中，先前有报道指出，该类蛋白参与棉纤维发育调控过程的调控，但对于LIM蛋白在棉花花药发育中的功能研究却鲜有报道。本文对两个在棉花花药中高量表达的LIM蛋白基因(命名为G卯zn以和G厅儿n纪)进行了克隆鉴定，并对其编码蛋白的相关生化功能进行了分析，获得如下研究结果：1、GhPLIMl和GhPLIM2蛋白的亚细胞定位分析为研究GhPLIMl和GhPLIM2在棉花花药发育中的功能，探究G11PLIMl和GhPLIM2蛋白是否也如其他LIM家族蛋白一样能够与肌动蛋白细胞骨架相互作用，构建了pBll2l—G解忆删7一GFP和pMD—G厅儿胁纪一GFP融合蛋白表达载体，

7、通过农杆菌LBA4404转化棉花，观察转基因棉花愈伤细胞，均可以观测到GFP荧光。在共聚焦显微镜下观测发现，GlIPLIMl—GFP不仅分布在细胞质中，也具有细胞核定位信号。在细胞质中，GhPLIMl—GFP形成一个网络状分布，同时GhPLIMl．GFP荧光信号也在细胞核中有一定的积累。GhPLIM2具有与GhPLIMl类似的亚细胞定位。这说明GllPLIMl和GllPLⅡ订2蛋白都可能是F．actin结合蛋白，且在细胞核中也有分布。2、GhPLIMl和GhPLIM2蛋白能够与肌动蛋白丝相互作用分别构建pET-28a-G卯￡胁“和pET_28a-G^P￡z^

8、纪原核表达载体，转化大肠杆菌BL2l菌株，原核表达纯