香菇菌种生产的方法与步骤

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时间:2019-02-26

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1、.香菇菌种生产的方法与步骤   (一)母种生产培养基的配方选择一是马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基(PDA):去皮马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂16~23克,水1000毫升。氢离子浓度1000~10000纳摩/升(pH5~6),用于分离、培养菌种。   二是PDA改良培养基(甲):马铃薯(去皮)200克,葡萄糖20克,磷酸二氢钾(KH2PO4)2克,硫酸镁(MgSO4)0.5克,维生素B110毫克,琼脂20克,水1000毫升,灭菌后氢离子浓度3163~10000纳摩/升(pH5.0~5.5),用于培养、分离菌种。   三是PDA改良培养基

2、(乙):马铃薯(去皮)200克,麸皮或米糠50克,硫酸镁0.5克,维生素B110毫克,琼脂20克,灭菌后氢离子浓度3163~3981纳摩/升(pH5.4~5.5)。   四是PDA改良培养基(丙):心材木200克,细米糠(或麸皮)100克,硫酸铵1克,麦芽糖(或葡萄糖)20克,琼脂20克,水1000毫升,灭菌后氢离子浓度3163~10000纳摩/升(pH5.0~5.5),用于分离菌种。   五是麦芽浸膏、酵母浸膏、琼脂培养基(MYD):麦芽浸膏3克,葡萄糖10克,酵母浸膏3克,琼脂20克,蛋白胨5克,水1000毫升(用于菌种培养)。  

3、 六是麦芽浸膏、蛋白胨培养基(MPA):麦芽浸膏20~25克,蛋白胨10克,琼脂20克,水1000毫升(用于分离、培养、保存菌种)。   上述6个培养基配方中,马铃薯、葡萄糖、琼脂(PDA)配方应用最普遍。在此着重介绍PDA培养基的配制方法与步骤:   1.制备培养基的操作程序   选择优质马铃薯,去皮或挖去发芽眼,削去发青皮,切成薄片,称取200克,置于钢精锅,加水1000毫升,煮沸后小火保持30分钟,趁热用8层纱布过滤后放人有1000毫升刻度的量杯(或量筒)中,补充水到1000毫升,倒回钢精锅,加琼脂继续加热,待琼脂溶化后,再加葡萄

4、糖,再补水至1000毫升,用玻璃棒搅均匀,趁热分装试管,或装入三角瓶备用。   2.分装试管   将配制好的PDA培养基,趁热(60℃)倒人事先准备好的量杯或玻璃漏斗,分装试管。每支试管装培养基为管长的1/4,培养液不可贴附管口内壁,如有沾附物必须揩拭干净。   3.做棉塞   ...取适量棉花做成较紧实的棉塞,塞入试管约2厘米左右,外留1厘米,紧贴试管内壁,松紧度以用手指提起棉塞而不脱掉为宜,光圆不起皱(如图3—1),尔后将试管放入铁丝筐内。   4.灭 菌   将装有培养基的试管放人灭菌锅的铁丝筐内,上面盖上牛皮纸或聚丙烯塑料薄膜,

5、包扎好,以防棉塞受潮。加热灭菌时,排尽锅内的冷气,当温度升到121℃时,维持30分钟后停止加热。待指针回到零点,先打开锅盖的1/10开度,等到无直冲蒸气时,再打开全部锅盖,取出试管。   5.在斜面上摆放试管   将取出的试管冷却到50~60℃后,放到用木架或木条摆成一定角度的斜面上,小试管斜面长2厘米,大试管(18×200)斜面长6厘米左右。待完全凝固后,收取备用。   6.灭菌效果检查   随机取3管斜面,放在28℃下进行空白培养5~7天后,检查斜面上有无细菌和霉菌菌落。如果发现有杂菌,说明灭菌不彻底,要重新灭菌。   (二)接种与

6、培养   1.接 种   在无菌室(接种室)或接种箱内,酒精灯火焰旁进行无菌操作。具体程序如下:左手拿菌种管和待接种的斜面试管,右手拿接种耙,在火焰上来回烧红,拔去菌种管的棉塞,将管口在火焰上烧一下,再把接种耙烧一下,迅速插入种管,稍加冷却,切取米粒大小菌丝块(一定要带培养基),迅速放入待接种管斜面中心位置(为争取时间,在斜面接两点以上为宜),拿出接种耙后,再把管口烘烤一下,烧一下棉塞,迅速塞好棉塞,灼烧一下接种耙。到此即完成了一个接种程序,以下依此类推。   2.培 养   将接种后的试管,放入培养箱或培养室进行恒温培养(25℃±1℃

7、),或利用适宜的自然气温培养。要保证培养室空气新鲜,环境干净,无光或弱光。为此,必须保持空气相对湿度70%左右,在试管上盖上纱布,或盖上薄棉毯,拉上窗帘,形成无光培养。因试管斜面长短不同,一般需经8~14天培养,才能长满试管斜面。   (三)母种质量检查及提高纯度对策   1.斜面优质菌丝形态   在马铃薯、葡萄糖、琼脂(PDA)培养基斜面上,菌丝生长洁白,呈棉绒状,密度一致,前沿菌丝(先端)整齐,粗壮。有的棉绒状菌丝发达,如苏香1号,Cr-02;有的棉绒状菌丝不发达,如271A,271B,早生一号。后者比前者菌丝生长快,但菌龄较长。.

8、..   2.斜面菌丝不纯现象   在斜面上菌丝灰白,棉毛菌丝不平坦不整齐,前沿菌丝不齐、有缺口,这说明有杂菌污染。如斜面上有异色,可能是镰刀菌污染。如斜面上特别是菌丝边缘出现粘稠状物即蜡状、油状,可能是细

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