细胞遗传学实验技术标准操作规程(sop)

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1、细胞遗传学实验技术标准操作规程(SOP)外周血培养及染色体的识别白血病骨髓及外周血染色体外周血细胞脆性位点检测技术人羊水细胞培养收获操作程序11绒毛细胞培养和染色体分析13高分辨染色体操作方法和识别15GII式显带法21N式显带法21R(反式)显带法23姐妹染色单体互换(SCE)技术23荧光原位杂交操作程序25阻1细胞遗传学实验试剂配制标准操作规程(SOP)27天平称量操作规程27药匙处理操作规程27PBS配制规程28胰酶配制规程28培养基配制规程29INHCL配制规程29INNaOH配制规程29外周血培养及染色体的识别1.原理：外周血小的淋巴细胞儿乎都是处在G。期或G期，一般

2、情况下是不分裂的。当在培养基中加入植物血凝素（PhytohaemagglutininPHA）时，这种小淋巴细胞受到刺激后转化为淋巴母细胞，并开始进行有丝分裂。经过短期培养后，用秋水仙素处理就可获得大量中期分裂相的细胞，制片后可以清楚地对染色体进行观察与分析。2.外周血培养与收获操作步骤：2.1采血：用20:1肝素（0.4%）温润无菌注射器抽取外周血5ml（注意:消毒时需脱碘）。2.2.种血：将注射器搓捏，使血样混匀，在无菌条件下，用7号针头垂直种血0.3ml土抗凝血（成年男子28滴，成年女子30滴左右，儿童32滴）至外周血培养基内。2.3.培养：将培养瓶放入37°C恒温箱屮培养

3、68-72小时，注意第二观察培养液有无凝血、溶血或长菌的现象，可每天培养液摇一摇，以便细胞可获得充分的营养，但一般情况下可不摇。2.4.制片过程：2.4.1.加秋水仙素：在培养完成前2-3小时，加入浓度为20ug/ml的秋水仙素2-3滴（7号针头竖滴）后，继续培养2-3小时。2.4.2.离心：将培养液用吸管吸至离心管中（100ml离心管）2000转/分X10分钟（Beckman离心机）。2.4.3.低渗液处理：弃上清，加入已预温至37°C的0.075mol/L氯化钾溶液约6-8ml,用吸管充分打匀，放入37°C水浴箱中，温育30分钟。2.4.4.预固定：即在离心管中加入现配的预

4、温至37°C的甲醇、冰醋酸固定液（3:1）lrnl左右，轻轻混匀。2.4.5.再次离心：2000转/分X10分钟。2.4.6.第一次固定：弃上清，加入现配的预温至37°C的新配固定液约6-8ml,轻轻混匀，然后2000转/分离心10分钟。2.4.7.第二次固定与第一次固定相同。2.4.&制片：弃上清，用固定液将沉淀调成细胞悬液（一般不宜太浓）在冰片上滴片，一般高度为30cm±,每张片上滴2滴。烤片：2.5.显带：先将玻片放在预温至37°C的0.025%胰酶溶液中（PII二7.2-7.4）消化1'30”左右，每次的作用时间并不完全相同。可先试一张片子，再根据显带效果调整胰酚作用时

5、间，再放在预温至37°C的0.85%NaCl溶液中漂洗两次，在预温至37°C的Giemsa溶液中染色10分钟，白来水冲洗干净，用吹风机吹干后，即可阅片。3.各号染色体的识别：各号染色体的界标和带型特征A组染色体：包括「3号染色体，其长度最长的1号和3号染色体的着丝粒约在1/2处,2号染色体的着丝粒约在3/8处。1号染色体：着丝粒和次缢痕染色深。短臂一一近侧段和中段各有一条深带，其中段深带稍宽，在处理较好的标本上，远侧段可显出3〜4条淡染的深带。此臂分为3区，近侧的深带为2区1号带，屮段深带为3区1号带。长借一一次缢痕紧贴着丝粒，染色浓。其远侧为一宽的浅带，中段和远侧段各有两条深

6、带，以中段第2深带染色较浓，中段两条深帯稍靠近。此臂分为4个区，次缢痕远侧的浅带为2区1号带，中段第二深带为3区1号带，远侧段第三深带为4区1号带。2号染色体：短臂一一可见4条深带，中等的两条深带稍靠近。此臂分为两个区，中段第2、3深带之间的浅带为2区1号带，长臂一一可见6〜7条深带，此臂分为3个区，第2和第3深带之I、可的浅带为2区1号带,第4和第5深带之间为3区1号带。3号染色体：着丝粒染色浓。在短臂和长臂的中段各有一条明显宽阔的浅带，是该染色体的特征。短臂般在近侧段可见两条深带，远侧段可见3条深带，其屮远侧段近端部的一条较窄，且着色较淡，这是区别3号染色体短臂的显著特征。

7、此臂分为2个区，中段浅带为2区1号带。长臂一一一般在近侧段和远侧段各有一条较宽的深带。在处理较好的标本上，远侧段的深带可分为三条深带，此臂分为两个区，中段浅带为2区1号带。B组染色体：4号染色体：短臂一一可见一条深带，短臂只有一个区。长臂一一可见均匀分布的四条深带，在处理比较好的标本上，在第2、3深带Z间还可显出一条较窄的深带。此臂分为3个区，近侧段第1、2深带之间的浅带为2区1号带；远侧段笫3、4深带之间的注带为3区1号带。5号染色体：短臂一一可见广2条深带，其远侧段的深带宽而且色浓。此臂