tnf-α增强小鼠骨髓间充质干细胞免疫抑制作用的探讨

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1、TNF．仅增强小鼠骨髓问充质干细胞免疫抑制作用的探讨摘要目的：探讨肿瘤坏死因子．Q(TNF．0L)对小鼠骨髓间充质干细胞(bonemarrowstromalceils，BMSCs)免疫抑制作用的影响。方法：采用全骨髓贴壁培养法分离培养小鼠BMSCs，观察其细胞形态学变化；应用流式细胞术鉴定小鼠BMSCs表面标志物CD29、CD34和CD44的表达；应用免疫荧光法检测小鼠BMSCs的CXCR4的表达；通过油红O和阿尔新兰染色分别来鉴定BMSCs成脂和成软骨诱导；Elisa试剂盒检测细胞培养上清液中白介素-10(IL．10)和前列腺素2(PGE2)的表达；通过免疫印迹实验(WestemBlot)检

2、测培养细胞的环氧化物水解酶2(COX．2)和NF一1cB蛋白水平的表达。结果：体外培养的小鼠BMSCs快速贴壁并呈现克隆性生长，集落中心增殖的细胞大多为圆形，边缘细胞呈梭形；流式细胞术鉴定观察到小鼠BMSCs表面标志物CD29阳性表达率为84．89％，CD44阳性表达率为95．77％，而CD34呈阴性表达；免疫荧光检测到CXCR4的阳性表达率达到100％；油红O和阿尔新兰染色后明显看到BMSCs分化为脂肪细胞及软骨细胞；Elisa试剂盒检测25ng／ml和50ng／mlTNF—Q处理组上清液中IL．10的表达水平和对照组相比没有明显的增加，而在100ng／mlTNF．Q刺激时，细胞上清液中IL

3、一10的表达水平较对照组明显增加咖=0．002<0．05)，而细胞上清液中PGE2的表达也有相似的结果，在100ng／mlTNF—a刺激时，PGE2(p=O．02

4、pha(TNF—Q)promotestheimmunosuppressiveeffectofbonemarrowstromaicells(BMSCs)ofmiceviaNF—KBpathwayAbstractlIllllllllllllllllllllJII}llllllPJIIlllllJY2588947Object：Toexploretheimmunosuppressiveeffectoftumornecrosisfactoralpha(TNF一叻actingonbonemarrowstromalcells(BMSCs)ofmice．Methods：BMSCswerecultivatedv

5、iawholebonemarrowadherentculturemethodandcellmorphologywasobservedbyinvertedphasecontrastmicroscope；theexpressionofsurfacemarkerofBMSCs，such鹊CD29、CD34andCD44we．redetectedbyflowcytometry，theexpressionofCXCR4Wasdetectedbyimmunofluorescenceassay；thedifferentiationofBMSCswasidentificatedbyoilredOandalci

6、anbluestain；levelsoftheIL·10andprostaglandinE2(PGE2)ofcellculturesupematantweredetectedbyElisakits；westernblotwasusedtomeasurecyclo—oxyge—nase一2(cox一2)andnuclearfactorr,BfNF-1出)proteinlevelsofTNF-atreatedanduntreatedBMSCs．Results：BMSCsinvitrowereculturedadherentlyandpresentedinaclonalgrowthmanner．Ce

7、llsinthecenterofcolonyWeremostlyball-shaped，whilethose}ontheedgeofcolonywerespindle—shaped．ThepositiveexpressionofCD29was84．89％andCD44was95．77％，whiletheexpressionofCD34Wasnegative．Theexpressionlevelof