ephaephrina信号系统在小鼠视网膜细胞发育中的表达与意义

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1、万方数据硕士学位论文学校代码[哇i圭EphA／EphrinA信号系统在小鼠视网膜细胞发育中的表达与意义StudyontheExpressionandSignificanceofEphA／EphirnAintheDevelopmentofMouseRetina论文答辩日期作者姓名：蒋澍学科专业：临床医学研究方向：眼科学学院(系、所)：湘雅二医院指导老师：唐罗生教授答辩委员会主席望鲨中南大学二。一四年五月一万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加

2、以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：j社日期：监年L月4日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅：学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采

3、用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：j蝉日期：盥L年工月卑日导师签些日期：盖盟够月幺日万方数据EphA／EphrinA信号系统在小鼠视网膜细胞发育中的表达与意义摘要目的：研究EphA／EphrinA信号系统在正常小鼠的视网膜发育过程中的表达，探讨EphA／EphrinA在视觉发育过程中的意义与视网膜感光细胞轴突生长中的导向作用。方法：1．饲养发育正常新生C57BL／6小鼠60只，在其生长至出生后第1天(P1)、第3天(P3)、第5天(P5)、第7天(P7)、第9天(P9)及4周时随机选取

4、小鼠10只，麻醉后在解剖显微镜下分离同时期的小鼠眼球20只。其中10只眼球解剖后只保留其视网膜，另外10只保持眼球完整性。2．将步骤l中分离的5只完整眼球制成石蜡切片，经HE染色在光镜下可见不同日龄段的小鼠视网膜发育情况，特别是P5一P9期间小鼠视网膜外丛状层的形成过程。3．将步骤l中分离出的10只小鼠视网膜提取mRNA，用RT．PCR的方法检测EphA／EphrinA信号家族中各个亚类在视网膜的表达情况，筛选出表达量最高的亚类EphA4。4．将步骤1中另外5只完整的小鼠眼球制作成冰冻切片，用步骤3中筛选出的亚类EphA4抗体及特异

5、性表达小鼠感光细胞和双极细胞的Recoverin抗体，行免疫荧光染色实验，观察小鼠视网膜感光细胞轴突生长情况及外丛状层的形成过程。II万方数据结果：1．／J、鼠视网膜发育中各时期的形态变化。P1一P3时期小鼠视网膜结构较为单纯，内核层及外核层尚未分出，外丛状层未形成，感光细胞由感光前体细胞分化出，散在分布于神经母细胞层，轴突短细，P5．P7时期视网膜感光细胞成熟，轴突结构趋于完整，向内生长与内核层中新分化出的双极细胞联系，形成外丛状层，至P9时期，视网膜的各层细胞结构基本稳定，外丛状层结构清晰明确。2．EphA／EphrinA在小鼠

6、的视网膜中的表达。运用GraphPadPrism绘制出统计图表显示EphA4在小鼠视网膜中整体表达量最高，EphA6与EphrinAl在视网膜中无表达，EphA4在各个时间点，运用SPSSl7．0统计软件进行单因素反差分析，N=3，得出均数士标准差：PI(0．48+0．33)，P3(0．55：k0．23)，P5(O．76士0．11)，P7(1．12士0．88)，P9(0．74+0．08)，4W(0．66+0．07)，P<0．05，差异有统计学意义。3．不同时期小鼠视网膜Recoverin及EphA4表达。P1至P3阶段可见Recov

7、erin表达于小鼠视网膜感光细胞胞膜及胞体，散在分布于神经母细胞层，EphA4主要表达于神经节细胞与内丛状层，P5．P7可见Recoverin表达的感光细胞轴突发育成熟，外丛状层形成，个别感光细胞散在于内核层中表达，轴突延伸至内核层，EphA4表达于节细胞层至内核层，较P1一P3期表达强烈。P9中Recoverin强表达于外核层中感光细胞的胞膜、胞体及轴突上，可见感光细胞成熟形态，轴突集中至外丛状层，外丛状层稳定形成，双极细胞在内核层初步形成，亦有Recoverin的较弱表达，EphA4在内丛状层及外丛状层的表达最为强烈，形成两条平

8、行的荧光带，而外核层I¨万方数据中基本未见其表达。结论：1．EphA／EphrinA信号家族中EphA4可能参与正常小鼠视网膜的发育过程。2．Recoverin阳性细胞主要分布在小鼠视网膜外层，EphA4阳性细胞主要分布在视网膜内层，