重金属铅对睾丸间质细胞的毒理作用分子机制研究

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1、温州医学院硕士学位论文重金属铅对睾丸间质细胞的毒理作用分子机制研究姓名：詹海潮申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：葛仁山；胡国新；黄亚东2012-05-23温州医学院硕士学位论文重金属铅对睾丸间质细胞的毒理作用分子机制研究摘要目的：通过蛋白质组学和基因水平检测探讨重金属铅对睾丸间质细胞的毒理作用机制，为临床男性性功能低下的治疗提供实验依据。方法：采用睾丸间质细胞的肿瘤细胞株R2C作为受试对象，暴露于含重金属铅的无血清培养环境，在l，3，6，12和24h收集细胞上清，利用放射免疫法，得出重金属铅作用细胞于各个时间点孕酮的变化；应用Western

2、blot和RealTimeRT．RCR的方法验证通路上酶在蛋白和基因水平的表达差异。结果：通过放射免疫检测各个时间点孕酮的变化发现，重金属铅影响R2C细胞合成功能。在特异性底物22R-HC作用下，从3h开始与对照组相比，呈现明显的时间效应关系，随着刺激时间的增加，孕酮的合成在12和24h受到了阻碍(p

3、)。结论：重金属铅对R2C细胞孕酮合成的影响，前期可能同时影响StAR、P450sce和3D．HSD，主要阻碍StARN达；细胞适应环境后使得这3种酶的表达代偿性增加，可能由于铅离子在后期影响了酶的活性，导致最终孕酮合成的减少。关键词：铅；睾丸间质细胞；类固醇激素；STAR．P450sec：3B．HSD2温州医学院硕士学位论文StudyonthetoxicmechanismofdamageinducedbyLeadinLeydigcellABSTRACTOBJECTIVE：Proteomicstechnologyandgeneleveldetec

4、tionwasusedtoinvestigatethetoxicmechanismofdamageinducedbyLeadinLeydigcell．ThismechanismislikelycontributedtoahostofpathophysiologicaleventsespeciallyforAndrogenDeficiencyinAgingMale(PADAM)andMalehypogonadism．ME’I'HoDS：LeydigtumorcellR2Cwasusedassubjectinthisstudy．Afterexpose

5、dtoLeadwithserum—free，cukuredfor24h．Cellsupernatantwascollectedat1,3，6，12and24h，detectedbyradioimmunoassay,progesteronechangeswereuncoveredateachtimepointwhileprocessedbyLead．WesternblotandRealTimeRT-PCRwereappliedtomakeaco-verificationonenzymeswiththediffererneesaboutprotein

6、andthelevelofgeneexpressionduringtestosteronesynthesispathways．1：迎SULrS：Progesteronechangeswereevaluatedbyradioimmunoassayateachtimepoint，itshowedthatLeadmighthaveaffectedsteroidhormonebiosynthesisfuction．Inthepresenceofspecificsubstrates，comparedtocontrolgroupfrom3h，itshowed

7、obviouslyatime—effectrelationship．Withtheincreasementofthestimulationtime，synthesisofprogesteronehasbeenhamperedat12and24h(p

8、tonormallevelsat12and24h，thedecreasingexpressionofStARproteinwasthem