毛细管电泳教学ppt课件

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1、毛细管电泳CapillaryElectrophoresis目录1、毛细管电泳的基本概念和原理2、毛细管电泳的分离模式与特点3、毛细管电泳在药物分析中的一些应用4、毛细管电泳应用热点5、毛细管电泳新技术6、毛细管电泳发展方向毛细管电泳capillaryelectrophoresis是利用被分析离子在电场作用下移动的速率不同而达到分离的目的，概念特点瑞典化学家Tiselius建立了“移界电泳”，成功地将人血清中的蛋白质分为5个主要成分，为蛋白质化学的发展奠定了基础。诺贝尔奖优点:操作简单，试样量少，分离效率高，成本低等。在迁移时间上的重现性，进样的准确性和检测灵敏度方面比高效液相色谱

2、法稍逊。毛细管电泳的基本原理离子的电泳迁移率不同，在电场中移动的速度不一样，利用这个原理可以把不同的离子彼此分离。电泳迁移率与分析物质所带电荷呈正比，与摩擦阻力系数呈反比。如果两种物质带有不同的电荷或者通过缓冲溶液移动的摩擦力不同，那么这两种物质可以彼此分离。毛细管电泳1离子移动的速率=eE=eU/LU是毛细管柱两端施加的压力L是毛细管柱总长。采用高电压可以达到使离子迅速移动和快速分离。2毛细管电泳中的板高N=eU/2D由于分离度随塔板数的增加而增加，因此为了获得高的分离度应采用高电压。在凝胶板形电泳中，一般最高使用的电压约为500V。在毛细管电泳中，一般可采用20,0

3、00~60,000V的高电压。3电渗流当高电压通过含有缓冲溶液的毛细管柱时，管内的溶质向阴极或阳极移动，产生电渗流。在柱内层氧化硅与溶质的界面上形成双电层是电渗流产生的原因。在典型的毛细管电泳分离中，若有电渗存在，离子的洗脱顺序是:首先是最快的阳离子，紧接着是依次减慢的阳离子，然后是全部的中性分子在一个区域出现，最后是最慢的阴离子，紧接着的是依次加快的阴离子。毛细管电泳装置一般在一根长40~100cm,内径10~100m的毛细管柱中充入缓冲溶液，柱的两端置于两个缓冲池中。在两个缓冲池之间的毛细管接有两个铂电极。试样从一端进入，而检测器则在另一端。使用的高电压可以反相，以能分析阴离子

4、。一般的进样方式是电动进样和压力进样。电动进样是将毛细管柱的一端及其相应端的电极从缓冲池中移出，放入试样杯中，然后在一准确时间范围内施加压力，使试样因离子移动和电渗流进入毛细管柱。压力进样是用压差使试样溶液进入毛细管。产生压差的办法可以采用在检测器端抽真空，或者通过提高试样端液面。毛细管电泳的分离模式毛细管区带电泳capillaryzoneelectrophoresis,CZE毛细管凝胶电泳capillarygelelectrophoresis,CGE毛细管等速电泳capillaryisota-chophoresis,CITP毛细管等电聚焦capillaryisoelect

5、ricfocus,CIEF毛细管区带电泳是基于试样中各个组分间荷质比的差异进行分离的。这种电泳模式的特征是整个系统都用同一种缓冲溶液充满。背景电解质的浓度一般高于试样，起运载电流的作用，其离子有一定的迁移率。当电流通过时，缓冲溶液中的阴，阳离子分别以一特定的速度分别向正极和负极移动。毛细管区带电泳可以分离小离子，而且能分离那些衍生化或反应生成离子的物质，如抗炎药物，氨基酸，蛋白质等物质。缺点是只能分析带电物质，对中性物质无能为力。高效液相色谱是以高压为驱动，依据和组分在两相中的分配比例不同，进而达到分离的目的，正事因为是高压为驱动力，致使柱子内流体是以抛物线形式向前移动的。区别一：驱动

6、力不一同，柱内流型不同高效液相色谱和毛细管区带电泳的两点区别高效毛细管电泳是以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术。在毛细管内液体流行时塞型。因为高效液相色谱和毛细管区带电泳柱内的液体流型不同，致使高效液相色谱的图谱比电泳的图谱的色谱带要宽。可以清晰的看出，液相色谱的色谱图谱带药比电泳的宽许多，这也是电泳分离效率高的原因之一。区别二：分离原理不同，致使分离物质不同高效液相色谱适合分离沸点高的大分子物质，各物质在柱内随着流动相运动，而各物质和固定性之间的作用力不同，也就是说各组分在流动相和固定相之间的分配比不同，进而达

7、到分离的目的。而毛细管区带电泳不能分离在缓冲溶液中的中性分子，只能分离在缓冲溶液中带点的物质。这是因为电泳柱子内壁形成了双电层，致使电泳柱子内壁带有负电荷，可以吸附阳离子，在电场力的作用下，阳离子整体向阴极移动，形成了电渗流，从而使各物质之间分离开来。电泳分离带电物质的原理图毛细管凝胶电泳是将生物大分子如蛋白质，DNA片断，按相对分子质量大小进行分离的一种分离方法。毛细管凝胶电泳一般是在多孔的凝胶基质上进行，最常用的凝胶是在交联剂的