分子生物学实验-western_blot实验步骤详解ppt

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1、WesternWill$Wang$Ph.D.$CellSignalingTechnology
•4KllBOMSGlOSMCKINSTlTMy,:SI.(4BC)是美国著名的生物×司和细胞信号转导研究的领导者i提供特色的用于信号转导研究的抗体、6<:B2试剂盒、蛋白翻译后修饰组学服务等产品。•4BC拥有rs的生产和研发队伍i发表的文章多次收录在>GXuVK、4Kll、BIOKSIK等杂志n。•其高质量的产品和rs的研发精神已被全球客户推崇xc细胞信号转导研究的金标准df4BC抗体的特色抗体验证k

2、%h蛋白表达水平n的验证•检测细胞系#组织样品w的特定目的蛋白表达的情况i以验证生产的抗体可以检测到内源蛋白的水平i以及抗体的种属反应性和特异性。2h磷酸化的特异性验证•用抗体对磷酸酶处理和未处理的裂解物样品进行检测以确定磷酸化抗体的特异性。3h各种生物因子处理验证•用生长因子、细胞因子以及激活或抑制剂处理细胞系样品i以检测所生产抗体是否识别特定的目的蛋白和相应的修饰状态的蛋白。4BC抗体的特色
(hWOA>2敲除实验利用WOA>2转染细胞样品i然后进行检测以验证抗体的特异性。)h批次间的稳定性所有新生产的抗体

3、都同以往批次的抗体进行比较i以确保抗体表现的稳定性。4BC抗体的特色
•x了研发出一v单抗而进行------数以百计的wKWXKVS杂交实验4BC技术支持
•4BCx您提供卓越的客户服务和技术支持。研发和生产抗体的科学家会及时回答您的问题并帮您分析和解决遇到的实验问题4BC的学术资源•免费的蛋白质翻译后修饰数据库l•激酶、组蛋白修饰、泛“连接酶及致癌基因等大量信息数据l•M:C;TIN癌症信号通路研究论坛l•4BC年度目录册与技术参℃资料EKWXKVS学术资源EKWXKVS白皮书EKWXKVS大电影EKWXKV

4、S杂交实验要点与问题分析EKWXKVS杂交实验
依据蛋白的大小i利用电流把细胞或组织w的蛋白分离开i并使用抗体来检测样品w目标蛋白的存在与否以及表达水平的高低。EKWXKVS步骤概览%.样品制备2.n样与电泳3.转膜(.封闭).抗体孵育和检测样品制备n样与电泳转膜封闭抗体孵育#检测掌控你的实验%.实验对照•任何一v实验w的重要℃虑就是加入合适的对照。阳性和阴性参照可以确保你的抗体检测到信号的正确度。对照细胞裂解物http://www.cellsignal.com/support/controls.html掌控你

5、的实验2.

6、生理条件oi如缺氧及糖尿病时i82P59g#)%7(h全细胞#细胞质30-(0会导致在一些特定细胞类型w82P59的表达增加对抗微生物和抗有t分裂药物耐受性的pCuHulOSg#2%2,i#2%2)h全细胞#细胞质))同而会导致CuHulOS的表达发生变化D524%#PTVOSg#(66%i#(,66h线粒体3%4OF:Dg#(,)0i#%%-67h线粒体%62的样品掌控你的实验3.细胞特

7、定组分RGVPKV•当你正在制备细胞核与细胞质抽提物时i应当使用细胞分离RGVPKV以确保正确的得到了裂解物。http://www.cellsignal.com/catalog/organelle.html%.样品制备
%.样品制备2.n样与电泳3.转膜(.封闭).抗体孵育和检测
%.样品制备
%h裂解液裂解缓冲液里含有p同浓度的变性剂i盐i酶抑制剂g如磷酸酶抑制剂或蛋白酶抑制剂hi这些试剂用于分离细胞i溶解蛋白i防止降解。目标蛋白裂解缓冲液全细胞普通细胞裂解缓冲液#-,03或#-,)2膜结合的A:P2裂解液#

8、-,06或普通细胞裂解缓冲液#-,03核内蛋白A:P2裂解液#-,06线粒体蛋白A:P2裂解液#-,06•4Kll