管道泄漏信号采集与处理技术研究

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1、郑州大学2003届硕士研究生毕业论文雷公藤甲素对变应性鼻炎豚鼠模型基因转录的影响及机制研究雷公藤甲素对变应性鼻炎豚鼠模型基因转录的影响及机制研究研究生邢海杰导师张笑如陈向东郑州大学第二附属医院耳鼻咽喉科河南郑州450003中文摘要研究现状：变应性鼻炎(Allergicrhinitis，AR)是由抗原特异性IgE介导的，以介质释放为开端的多种免疫细胞和细胞因子参与的鼻粘膜的慢性变应性炎症反应，近几十年来发病率呈增加趋势，严重影响人们生活质量，诱发支气管哮喘、鼻窦炎和鼻息肉等疾病，已成为+个亟待解决的全球性健康问

2、题。AR是IgE介导的I型变态反应，神经及递质均参与发病过程，免疫细胞及细胞因子(Cytokine，CK)是发病的中心环节，集中表现为Th2类优势反应亢进。2000年，Yssel等使用原位杂交(Insituhybridization，ISH)方法证实支气管哮喘患者气管粘膜中IL一4mRNA、IL一5mRNA、GM—CSFmRNA等基因表达水平明显升高。基础研究表明IL一4生物学作用，1泛：刺激B细胞分化成熟、分泌IgE抗体；促使IgM向IgE转换；诱导ThO细胞分化为Th2类细胞，分泌Th2类细胞因子IL一4

3、、IL一5、IL一13等，增强Th2类优势免疫反应；趋化嗜酸性粒细胞(Eosjnophil，EOS)，上调血管内皮细胞粘附分子一1(Vascul8rcelladhesionmolecule一1，VCAM一1)的表达，募集炎症细胞，促发和加重AR病理反应。IL一5可调节EOS等免疫细胞的增殖、分化、活化、释放细胞毒物质，维持和延续AR的慢性炎症反应；刺激血管内皮细胞表达VACM-I，增加EOS的粘附性。GM—CSF与IL一5有胁同作用，主要作用于EOS，促其分化成熟，进入外周血中，在AR患者鼻粘膜中可趋化、活化

4、EOS；参与AR炎性反应。因而IL4、IL一5和GM—CSF等主导着AR的病理发展过程。2002年，llussain等使用核酸疫苗抑制lL一4mRNA郑州大学2003届硕十研究生毕业论文雷公藤甲素对变应性鼻炎豚鼠模型基冈转录的影响及机制研究、IL一5mRNA和GM—CSFmRNA等的表达，可明显减轻支气管哮喘鼠体内Th2类优势反应，，减少EOS的浸润，控制症状。CK等炎性因子的基因表达与核转录因子的活性高低密切相关。核转录因子一kappaB(NucleartranscriptsfactorkappaB，NFK

5、B)是其中一种，它可以通过与核内NFxB反应性基因结合，调节CK的表达水平，是调节炎性反应的关键核因子，1998年，Hart等发现在支气管哮喘患者气管粘膜细胞中有大量的NF—KB激活，提示NFKB参与了变应性疾病的发生。目前，AR的治疗药物众多，类固醇类药物疗效确切可靠，但严重副作用限制其广泛使用。寻找理想的替代药物重要而迫切。雷公藤类药物具有广泛的免疫抑制作用和激素样作用，无激素样副作用，已成功应用于支气管哮喘的临床治疗，后者在解剖、组织生理、免疫病理及治疗等方面与AR存在广泛的相似性。雷公藤类药物对AR的

6、治疗作用研究迄今未见报道。目的：本实验拟通过AR豚鼠模型探讨雷公藤甲素(Triptolide，TP)对AR病理发展过程中的关键致病因子IL4、IL一5及GM—CSF基因表达的影响及机制，为TP试用于AR临床治疗提供实验依据。方法：动物分组：80只健康豚鼠随机分为四组：卵清蛋白(Ovalbumin，0V)致敏组，TP处理组，地塞米松(Dexamethasone，DM)处理组和生理盐水(0．9％Sodiumchioride，SC)组。建模：参照Konno方法并改良：基础致敏：OV0．3mg，Al(OH)。30mg

7、，加生理盐水至iml，腹腔注射，隔日一次，共7次；强化致敏：0．25％or／生理盐水液2ml，雾化吸入，连续5天，间隔一周；激发：1％OV2050ul双侧鼻腔滴入，观察豚鼠症状，2h后再观察1次。根据吉林大学医学院报道建模评分标准判定模型是否成功。TP处理组：使用TP0．5mg／kg分六次于强化致敏和激发前30min腹腔注射和鼻腔滴入；DM处理组：给予DMlOmg／kg，方法同TP：SC组：使用sc代替OV。其它处理均同OV组；取材：模型成功后48h，0．3％戊巴比妥钠lml／kg腹腔注射麻醉，取出鼻粘膜；取

8、外周1m，肝素抗凝，用密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞(Peripheralblood’mononucleareell，PBMC)，处理后制片待检。NF--KB活性检测标本制备：取豚鼠PBMC分为四组，在RPMll640培养液中重悬培养，佛波脂(Phorbolmyristateacetate，PMA)刺激组：加PMA至50ng／ml；郑州火学2003届硕上研究生毕业论文雷公藤甲豢对变应性鼻炎豚鼠