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1、克隆猪的重要事件以及产业化应用前景Situationworldwide–forpigcloningUSAEnglandJPNCHNDKITAGERSouthKoreaAUS胚胎细胞核移植克隆1985年:美国威斯康星大学RoblandFirst首次简单的描述了猪的胚胎细胞核移植{JReprodFertil,33(Suppl):101-114};1989年:该大学N.First教授课题组的Prather等，报道了世界首例胚胎细胞克隆猪诞生{Prather,etal.BiolReprod,41:414-418};特点：供核细胞为猪早期胚胎卵裂球，受体卵胞质为体内成熟的
2、MII卵母细胞，体内培养后进行胚胎移植！！！此后到1999年，利用胚胎细细胞核移植获得克隆猪的报道就再也没有了！！！直到2000年，才有我国东北农大李光鹏教授等再次成功获得胚胎细胞克隆猪，重复出Prather等人的研究{LiGP,etal.Cloning,2(1):45-52。普通体细胞克隆（1）1999年，美国密苏里哥伦比亚大学Prather教授课题组报道了利用猪胎儿成纤维细胞与体外成熟卵开展体细胞克隆的研究结果，但是效率很低，所获囊胚质量也差，没有获得克隆猪{TaoTetal.cloning,1:55-62;AnimReprodSci,56:133-141}
3、;Prather教授甚至一度想放弃体细胞克隆猪的研究！2000年，英国PPL公司{Polejevaetal.Nature,407:86-90}，日本NIAI动物遗传育种系{Onishetal.Science,289:1188-1190}相继利用体内成熟卵开展体细胞克隆获得成功，但是操作复杂，效率低。2000年，美国Infigen公司{Betthauseretal.NatureBiotechnol,18:1055-59}的报道利用体外成熟卵、胎儿成纤维细胞成功获得克隆猪，才奠定了今天流行的利用体细胞核移植生产克隆猪的方案！！！普通体细胞克隆（2）此后，类似的研究如
4、雨后春笋，虽然成功的国家不多，也还是吸引了几十家课题组不断尝试结合转基因、基因敲除等技术为新品种培育、异种器官移植、人类疾病模型研制等工作打基础。2006年，Prather课题组LiRF等将克隆胚胎进行玻璃化冷冻，获得克隆猪{Lietal.,BioReprod.75:226-230}http://arbg.missouri.edu/labs/prather/history.php2007年，丹麦奥胡斯大学成功获得国际首例手工克隆猪{Duetal.,Theriogenology,68:1104-1110}；同年，还得到了玻璃化冷冻手工克隆胚胎的后代{Duetal.
5、,cloningandstemcells,9(4):469-176}。转基因体细胞克隆（1）2001年，Prather课题组报道首例转GFP基因体细胞克隆猪诞生{Parketal.AnimalBiotechnol,12(2)173-181};2002年，Lai等在“Science”和Dai等在“Naturebiotechnology”上几乎同时发表了敲除α-1,3半乳糖苷转移酶基因的体细胞克隆猪的文章;2003年，PPL公司的Phelps等在“Science”上报道了世界首例完全敲除α-1,3半乳糖苷转移酶基因的体细胞克隆猪诞生;2005年，Kolber-Sim
6、onds等在“PNAS”上才获得无α-1,3半乳糖苷转移酶基因的体细胞克隆猪…转基因体细胞克隆（2）2006年，Prather课题组的Lai等成功克隆了国际首例能丰富表达omiga-3型不饱和脂肪酸的转基因克隆猪，为家猪新品种培育奠定了基础;2007年，丹麦奥胡斯大学也得到了可能整合老年痴呆症致病基因的克隆猪……TheJournalofClinicalInvestigationhttp://www.jci.orgApril2008SEPTEMBER26，20082005年，中国农大报道国内首例普通克隆猪2006年，东北农大获得国内首例转GFP基因克隆猪2007年
7、，上海得到普通克隆猪2007年，广西大学相继得到普通克隆猪2007年，中国农大先后获得世界首例转溶菌酶基因克隆猪、敲除抑肌素基因克隆猪我国大陆体细胞克隆猪概况克隆猪技术本身的发展卵母细胞：体外成熟（在美国已经有商业化的公司专门提供体外成熟的卵母细胞）。胚胎重构：传统的显微操作法Vs.手工克隆法，二者效率相当，但手工克隆法前期投入少，无需贵重仪器。重构胚培养：较为成熟，体外发育囊胚率甚至高于IVF。高效性：与传统克隆相比，手工克隆在囊胚率、怀孕率上都显示出较高2.稳定性：手工克隆技术通过囊胚生产，选择优质囊胚进行移植，效率稳定。3.操作简便性：手工克隆完全手工完成
8、，在经过短期培训后，一个
