萝卜雄性不育系及其保持系的生理生化分析和ssr标记研究

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1、山东农业大学硕士学位论文萝卜雄性不育系及其保持系的生理生化分析和SSR标记研究姓名：韩晓雨申请学位级别：硕士专业：蔬菜学指导教师：魏佑营；王淑芬20120611山东农业大学硕士学位论文中文摘要萝卜杂种优势明显，利用一代杂交种Fl作为生产用种，可实现萝卜的优质、抗病和高产。为解决生产中杂交种纯度不高的问题，用雄性不育系选育杂交种是解决人工去雄最为经济、有效的途径。为扩大萝卜雄性不育系在生产上的应用范围，以萝卜雄性不育新种质为试材，对不同时期叶片及盛花期花蕾、花朵的相关生理生化指标进行测定，可进一步探讨萝卜雄性不育的生理生化

2、机制，为萝卜雄性不育的育种提供理论依据。EST．SSR表达序列标签微卫星，是基于EST简单重复序列设计的一种新型分子标记，解决了基因组SSR开发过程中需要构建基因组DNA文库步骤繁琐等问题，已广泛应用于植物遗传图谱的构建、遗传多样性的评价、比较作图、亲缘关系的鉴定等方面。作为中国萝b(RaphanussativusL．)的起源地，我国萝卜种质资源丰富。但由于萝卜生物技术方面研究较少，SSR标记在萝卜上的应用国内尚未见报道，许多重要性状没能得到有效开发。对影响萝卜SSR扩增反应的因素进行研究，确立最佳反应体系，并对不育系进

3、行SSR筛选，可为SSR标记萝卜重要性状，进而为我国萝卜种质资源的深入研究和利用奠定基础。本试验以萝I-雄性不育系及其保持系为试材，测定了不同发育时期叶片、花和花蕾中游离脯氨酸、可溶性蛋白、可溶性糖、丙二醛、．超氧阴离子、以及SOD、POD、CAT的活性。结果表明，盛花期花蕾和花朵中，不育系脯氨酸、可溶性蛋白、可溶性糖的含量均低于保持系，丙二醛和超氧阴离子高于保持系，SOD、POD和CAT酶活性变化与萝I-的雄性不育相关；以萝卜的不育系和可育系DNA为材料，利用J下交设计L16对萝卜SSR-PCR反应体系的5因素(Taq

4、酶、Mg十、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化试验。获得了最佳的反应体系，在20ln反应体系中，0．10mmol／LdNTP，3．0mmol／LM92+,50ng模板，0．5001xmoUL引物，1．0UTaq酶。利用优化的反应体系，扩增条带清晰，可满足不同引物组合和萝卜材料的要求。此研究为今后利用SSR技术对萝卜进行种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位奠定了基础。同时进行了SSR分析，共筛选了300对SSR引物，其中5对引物在两池之间表现差异，可进行进一步测序和筛选。关键词：萝l、；雄性不育；丙二醛；酶活

5、性；EST-$SR，分子标记萝卜雄性不育系及其保持系的生理生化分析和SSR标记研究RadishphysiologicalandbiochemicalcharacterizationofmalesterilitylineanditsmaintainerlineandSSRmarkersAbstractRadishhybridshaveobviousadvantages，usinghybridgenerationofF1硒productionCanimproveradishquality，diseaSeresistancea

6、ndyield．Inordertoimprovehybridspurity，malesterlelinebreedinghybridsisthemosteconmicallyandeffectivelywaytosoveartificialemaSculation．Inordertoexpandthescopeofapplicationofradishmalesterilelineintheproduction，usingthemalesterilityofnewgermplasmofradishastestmateri

7、lals，measuringthephysiologicalandbiochemicalindicesofleaves，floweringbudsandflowersindifferentperiods，SOthatwecanfurtherexplorethephysiologicalandbiochemicalmechanismsofradishmalesterileandprovideatheoreticalbasisforthebreedingofradishmalesterile．EST-SSRexpressed

8、sequencetagmicrosatellitesisanewtypeofmolecularmarkersbasedonthedesignofESTsimplesequencerepeats．ItsolvethecumbersomeproblemsofneedingtobuildagenomieDNAlibrary