猪人工授精实验室关键技术点

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1、猪人工授精实验室实用技术要领张兴敏1,2，王皓1,2，张川江1,2，丁应兵1,2（1.重庆市69原种猪场，重庆409099；2.重庆市天豚种公猪站，重庆409000）摘要：全文概述人工授精实验室常用仪器设备配置及用途，重点阐述了实验室操作人员对公猪信息掌握的重要意义，实验室精液检测、稀释、分装，数据分析与存档要领。关键词：实验室；精液检测；公猪信息；数据分析随着我国养猪业的持续、健康发展，猪人工授精技术的逐步推广，公猪站和人工授精站如雨后春笋，与之配套的人工授精实验室硬件及人员建设的要求逐日提升。硬件设施配备先进、实用，从业人员综合素质高是对现代人工授精实验室建设的基本

2、要求，尤其是人员的综合素质凸显重要。根据调查，猪人工授精行业经营不规范的现象仍然存在，主要表现为从业人员服务意识淡薄，服务技能欠佳等。致使用户对从业者提供的精液质量，服务水平等方面没有足够的信心。从业人员存在年龄和文化参差不齐的现象，在观念、知识更新和操作上存在差异。所以实验室操作人员必须经过严格、系统化的培训，拥有严格按照操作规程操作的素质，以确保从实验室送出的每一份精液品质的可靠性和安全性。1人工授精实验室常用仪器设备和用品1.1主要仪器及用品电子称、显微镜+显微镜恒温板、精子密度仪、比色皿、干燥箱、恒温水浴锅、超纯水机、空调、冰箱、载玻片、盖玻片、微量移液器、移液

3、枪吸嘴、稀释粉、烧杯、采精杯、精液分装瓶、精液保温箱、玻璃棒、温度计、标签纸以及PH试纸等。1.2主要仪器设备、用品及用途[1]1.2.1电子称称量精液、稀释液。1.2.2显微镜及恒温板观测精子数、活力和畸形率；恒温板是用于载玻片、盖玻片恒温预热。1.2.3精子密度仪、比色皿测定精子密度。1.2.4干燥箱预热器皿和消毒用品。1.2.5恒温水浴锅等温精液和稀释液。1.2.6超纯水机制作超纯水。1.2.7稀释粉、烧杯配置稀释液。1.2.8载玻片、盖玻片精子活力检测。1.2.9微量移液器、移液枪吸嘴精液的取样或稀释。2熟练精液的检测、稀释、分装、保存的操作步骤2.1精液检测前

4、的准备2.1.1稀释液配制取1L的超纯水或蒸馏水加入1包稀释粉（不同厂商提供的配比有差异，严格按照说明书操作），充分搅拌并静置半小时待用；使用前需放置于37℃恒温水浴箱；按当日用量配制，不得保存至隔日再用；不得随意更改稀释液配方及配制比例，不同种稀释液不得混合使用。2.1.2稀释前的准备精液未回来前先将盛放烧杯的烘干箱和盛放分装瓶的恒温箱加热到37℃，并且在比色皿中加入240ul的稀释液以备检测密度。2.2精液品质检查[2]、[3]精液从采精室拿来后先查看精液颜色，正常精液为乳白色或浅灰色、略带腥味，偏碱性；精子密度越高，色泽越浓，其透明度就越低。若带有绿色或黄色则有可

5、能是混有尿液，若带有淡红色或红褐色则是混有血液，这样的精液应该舍弃不用。然后从37℃恒温箱中取出盛放精液的烧杯，放入电子天平秤上归零。将刚采回的精液轻轻放入烧杯中，注意尽量避免保鲜袋碰到烧杯内壁，用电子天平称量精液量，按1ml/g计量；接着用显微镜检查精子活率，检查活力时要求载玻片和盖玻片都应在37℃预热，合格精液要求活率不低于0.8（指呈直线运动的精子数所占的比例），；同时用移液枪量取100ul的原精量加入准备好的比色皿中，轻轻摇匀然后用密度仪测量密度，并将数据记录在专用采精记录表上。2.3精液的稀释稀释液配置时搅拌不均匀或被污染，稀释时与精液温度不相同，稀释方法不正

6、确，稀释倍数计算不精确，都会造成精子死亡，活力下降[4]。精液采集后应尽快稀释，原精储存不超过30分钟；稀释液与精液要求等温稀释，两者温差不超过1℃[5]；稀释时以精液温度为标准调节稀释液温度，不得反向操作；稀释前先计算需要加入的稀释液量。依据猪人工授精操作规NY/T636-2002稀释液用量=采精量×(密度×活力)×2-采精量。稀释时将稀释液沿盛精液的杯壁缓慢加入到精液中，并缓慢搅拌充分混合；高倍稀释时，先行低倍稀释(1:1)，稍后再作进一步稀释；要求稀释后每80ml含有40亿个精子。2.4精液分装精液稀释后，检查活率，若无明显下降，按每瓶80ml分装。为区别不同品种

7、的精液，可使用不同颜色的输精瓶或输精瓶盖或输精袋。若精液装不满输精瓶应排出多余空气，只留少许空气以备贮存过程中混匀精液，且要将口封严。在输精瓶贴上标签，或直接标记公猪耳号和采精日期、时间。2.5精液的保存将分装好的精液置入22℃～25℃的室温1小时后直接放置于17℃恒温箱中保存；输精瓶放入恒温箱时要平放，若长时间不摇动，由于精子的沉积，其能量的需要得不到满足，容易造成死亡，所以一般每隔12小时左右需要摇动一次。每天检查精液保存箱温度并进行记录，出现停电时需全面检查储存中的精液品质；尽量减少保存箱关开次数；做好精液保存记录。为了更好的完成实