上皮间质转化在tgf-β1联合tnbs诱导克罗恩病肠纤维化模型中的作用研究

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1、东南大学硕士学位论文上皮间质转化在TGF--β1联合TNBS诱导克罗恩病肠纤维化模型中的作用研究姓名：王宝偲申请学位级别：硕士专业：临床医学指导教师：嵇振岭2012-05-28上皮间质转化在TGF．p1联合TNBS诱导克罗恩病肠纤维化模型中的作用研究东南大学医学院研究生：王宝偬导师：嵇振岭教授摘要目的：建立TGF．131联合TNBS诱导的大鼠克罗恩病肠纤维化模型，研究肠上皮I、日J质转化(EMT)在克罗恩病肠纤维化中的作用。方法：j各Sprague—Dawley(SD)大鼠30只随机分为2组，模型组

2、20只，对照组lO只。模型组大鼠予距肛门8cm处注入lml含有2，4，6．三硝基苯磺酸(TNBS)30mg及99％乙醇0．4ml，倒立30秒后，让大鼠恢复24d"时，然后距肛f-J4cm处灌入500肛1含l×109pfu／ml'滴度Adeno．TGF．131的PBS(Ph7．4)。对照组大鼠不做处理。通过观察大鼠一般情况、体重、肠大体病理、组织病理来评价克罗恩病大鼠纤维化模型构建效果。利用免疫组化检测肠EMT标志物(E．cadherin、cytokeratin．18、Vimentin、a．SMA)表

3、达变化，分离肠黏膜上皮细胞，提取总RNA与总蛋白，通过RT-PCR及Westernblot检测EMT相关标志物(E-cadherin、Vimentin、0【一SMA、cytokeratin一18、Snail)的表达情况。结果：TGF．B1联合TNBS诱导的大鼠克罗恩病肠纤维化模型对肠道炎症与纤维化的模拟效果与对照组相比有显著性差异。免疫组化结果显示模型组较对照组Vimentin、c【．SMA表达显著上升，而E．cadherin、cytokeratin．18表达显著下降。RT．PCR、Westernb

4、lot均提示模型组较对照组Vimentin、c￡．SMA、Snail表达水平显著增高，而E．cadherin、cytokeratin．18表达水平显著下降。结论：肠上皮间质转化在TGF．131联合TNBS诱导的克罗恩病模型中肠纤维化形成发挥显著性作用。关键词：肠上皮问质转化；克罗恩病；肠纤维化英义摘要Roleofepithelial··mesenchymaltransitioninthedevelopmentofintestinalfibrosisinCrohn，SdiseaseRatModelin

5、ducedbyTNBSwithTGF．131Postgraduate：MedicalCollege，SoutheastUniversityWANGBao—caiSupervisor：AbstractProf．JIZhen—lingObjective：AsamajorcomplicationofCrohn’Sdisease(CD)，intestinalfibrosisisthoughttooccurasaresultofchronicinflammationanddysregulatedwoundhe

6、aling．Epithelial。mesenchymaltransition(EMT)isacomplexprocessinwhichepithelialcellslosetheirphenotypicandfunctionalcharacteristicsanddevelopfeaturesofthemesenchyme．TheaimofthispaperistodiscusstheroleofEMTinthedevelopmentofintestinalfibrosisinCDbyestabli

7、shingtheratsmodelswhichwereinducedby2,4，6一trinitrobenzenesulfonicacid(TNBS)withTGF-131．Materialsandmethods：30Sprague—Dawley(SD)ratswererandomlydividedintotwogroups，while20belongedtothemodelgroupand10belongedtothecontrolgroup．Ratsofthemodelgroupwereinje

8、ctedlmlTNBS／ethanolmixturefromtheanus，andinveged30seconds．After24hours，theratsweregivenanenemaof500“lPBS(Ph7．4)whichcontained1×109pfu／mltiterAdeno—TGF-131．TheeffectofCDratmodelwasevaluatedbyobservingratsingeneralsituation，bodyweight，int