人cd34%2b造血干%2f祖细胞和日本血吸虫的转录组学和蛋白质组学研究

《人cd34%2b造血干%2f祖细胞和日本血吸虫的转录组学和蛋白质组学研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、复旦大学博士学位论文人CD34+造血干/祖细胞和日本血吸虫的转录组学和蛋白质组学研究姓名：刘锋申请学位级别：博士专业：分析化学指导教师：杨芃原20060428论文独创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明并表示了谢意。作者签名封基论文使用授权声明日期：2』：』：!旦本人完全了解复旦大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交

2、论文的复印件，允许论文被查阅和借阅：学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名日期：进L丝盐鹳趼辱逊复旦太学博士论文摘要本论文在杨艽原教授和韩泽广研究员的指导下进行，主要工作在国家人类基因组南方研究中心完成。本博士论文的主要贡献为：1．对人CD34+造血干／祖细胞进行了转录组和蛋白质组学研究，鉴定了370个蛋白质，这是迄今为止鉴定最多的CD34+细胞蛋白，并且鉴定了各种转录组研究没能发现的133个CD34+细胞蛋白，发现了CD34+细

3、胞具有可塑性的新的证据，证明了反义核酸未能完全阻止其相应基因的表达，并提出一些蛋白的异质性是由于翻译后修饰造成；2．对日本血吸虫进行了大规模转录组学和蛋白质组学研究，得到了大量的重要发现。获得了约15000个基因种类，约占日本血吸虫基因总数的90％，其中包括8400多个血吸虫基因编码蛋白质，建立了目前世界上最大的日本血吸虫功能基因组公共数据库、基因克隆库和菌种库：鉴定了3260个不同生活周期的以及表皮的血吸虫蛋白，并首次鉴定了卵壳蛋白，提供了众多药物靶点和潜在疫苗的选择；在血吸虫基因中发现了大量的遗传多态

4、性位点，并用序列测定和蛋白质组数据验证；分析得到了血吸虫保守的和特异的蛋白，为认识血吸虫生物学特征、开发抗血吸虫药物以及研制血吸虫疫苗奠定了理论基础；3．鉴定并分析了纯化后的日本血吸虫样品中的63个宿主蛋白，并用免疫组化验证。这是首次发现如此多的宿主蛋白可能与血吸虫密切相互作用。这些宿主蛋白与宿主在血吸虫感染时的免疫反应、成虫的免疫逃避和肉芽肿的形成有关，从而丰富了宿主．寄生虫的相互作用方面的信息。本论文工作包括三个部分：1．蛋白质组学技术平台的建立与完善，为后续研究工作奠定了基础；2．人CD34+造血干

5、／祖细胞转录组和蛋白质组学研究，3．日本血吸虫转录组／蛋白质组学研究。其中造血干细胞研究和日本血吸虫研究是两个独立的研究课题。第一部分蛋白质组学技术平台的建立与完善优化了双向电泳．MALDI质谱分析有关的方法，包括蛋白质样品的前处理方法的选择和优化，双向电泳、胶内酶解的方法和优化，M√UDI．MS分析，以及数据库建立和手工解谱等：另外，建立并改善了色谱分离、质谱分析的技术体系、以及相应的大规模数据分析的技术策略。这些工作，搭建和完善了本单位的蛋白质组学研究平台，为本论文后续cD34+细胞和日本血吸虫的大规

6、模蛋白质组学研究奠定了良好的实验基础。第二部分人cD34+造血于，祖细胞转录组／蛋白质组学研究4复旦大学博士论文CD34+造血干细胞可以自我更新和分化成为血液细胞，近来有报道认为这些细胞还可以分化成为非血液细胞。CD34+细胞是研究最多的干细胞，最近也有人应用蛋白质组学方法对这些细胞进行了研究，但是结合转录组学和蛋白质组学方法，系统地研究CD34+细胞还未见报道。我们收集了脐带血cD34+细胞，应用转录组学研究方法结合蛋白质组学研究手段，包括双向电泳、微量液相色谱等技术分离蛋白质、生物质谱仪蛋白质定量与定

7、性测定，研究分析了CD34+细胞的蛋白质组。在CD34+细胞中鉴定了370个蛋白质，其中52个蛋白质与代谢、细胞骨架有关。蛋白质组数据还显示，CD34+细胞自我更新还需要其它与细胞分裂、染色质调控、RNA处理以及蛋白合成、蛋白折叠、蛋白修饰和蛋白降解有关的蛋白质。我们还鉴定出cD34+细胞中46个未知蛋白，证明了相关未知基因的表达。我们应用间接免疫荧光测定方法选择性地验证了四个代表性的蛋白质，包括膜蛋白、胞浆蛋白和核蛋白，结果证明了质谱鉴定所得到的数据的可靠性。本研究鉴定了各种成血细胞的代表性标志。这些数

8、据进一步说明了脐带血cD3针细胞具有多能分化潜力，可以成为不同的成血细胞。我们还惊奇地发现，脐带血CD34+细胞内含有通常与神经发育、眼睛、性腺发育相关的蛋白质，这显然提示CD34+细胞具有某种程度的可塑性，也就是造血干细胞可能分化成为非血液细胞。这也正是近年来于细胞的研究热点之一，因为于细胞的可塑性意义重大，它为干细胞的临床应用带来的光明的前景。我们的数据还显示，cD34+细胞表达一些激素和细胞因子，这说明这些因子可能通过自