β-arrestinl调控儿童急性淋巴细胞白血病起始细胞的增殖与甲基化研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文β--arrestinl调控儿童急性淋巴细胞白血病起始细胞的增殖与甲基化研究姓名：周晓燕申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：邹琳201205重庆医科大学硕士研充生学位论文13l—arrestin1调剖L童急性淋巴细胞白血病起始细胞的增殖与甲基化研究摘要目的：课题组前期研究发现D．撇stilll在儿童急性淋巴细胞白血病(伽上)白血病起始细胞(UC)的异常高表达，本课题进一步研究p一撇stilll在体内外对LIC的增殖能力，及对白血病发生发展的影响；研究B．a盯es血1对LIC

2、s细胞甲基化转移酶(Ⅸ心仃s)活性与表达的影响；研究D—arres血1对HOXa9、PTEN、P15等基因的甲基化与表达的影响；研究D．arrestilll与甲基化转移酶抑制剂对LIC增殖与白血病生存的作用，探索p—arres血1影响LIC甲基化的表观遗传学机制一，为儿童刽上诊治新靶点提供实验基础。方法：从儿童ALL患者骨髓中分选与鉴定具有CD34+CD38℃D19+标记的LIC细胞，运用si-pa盯est证1慢病毒重组载体抑制砧上一LIC细胞D一姗stilll表达，建立ALL．LIC细胞和小鼠的D．aⅡes

3、血1敲除模型；利用克隆形成实验检测si—pan℃stilll对ALL—LIC细胞增殖能力的影响；UC细胞异种移植到si-B撇stilllNOD／SCD小鼠体内，检测创_一L．UC细胞体内复制能力，利用小鼠的白血病进程与生存周期来监测D．arrestilll对白血病进程的影响；利用EUSA实验检测不同组细胞中甲基化转移酶∞Ⅻ岍)活性；利用荧光定量脚CR和Westemblot实验检测多基因的硼RNA和蛋白表达差异；利用甲基化特异PCR和荧光4重庆医科大学硕士研究生学位论文定量R]印CR检测相关基因甲基化水平和mR

4、NA表达水平；利用甲基化转移酶抑制剂5一蛔作用si_Da玎estilll细胞与老鼠模型。结果：成功建立抑制p一撇stinl表达的ALL-LIC细胞和小鼠模型，抑制p—a盯estinl后ALL—LIC细胞的克隆形成能力明显减弱，降低ALL—LIC细胞移植到NOD／SCD小鼠的白血病发生和组织浸润程度；经抑制p—a玎es血1表达HOXa9、PTEN、P15等多基因的表达和甲基化存在变化，抑制p-a盯es血1表达可以显著降低瑚心仃的活性和表达，抑制PTEN，P15基因的甲基化水平，使其Ⅱ浓NA表达水平增高；使用5也

5、a处理敲除pa盯est证1的LIC细胞和白血病小鼠发现，使用抑制剂能协同降低敲除D．arrestilll细胞克隆形成能力，推迟敲除D一眦stiIll小鼠白血病发生发展进程，降低骨髓、肝脾组织白血病细胞浸润程度，D№仃活性与表达降低。结论：p．arres血1在LIc细胞中显著增高，抑制p．aⅡestinl可降低ALL．LIC细胞的增殖和在NOD／SCⅢ小鼠体内白血病发生发展的能力，降低D№仃的活性和表达，从而影响PTEN的甲基化水平和表达，并协同甲基化抑制剂减缓ALL—LIC增殖能力，延缓白血病进程，提示甲基化

6、抑制剂可潜在用于ALL的临床治疗，与p—aHest证1协同作用有关。关键词：急性淋巴细胞白血病，白血病起始细胞，p—arrestiIll，甲基化重庆医科大学硕士研宄生学位论文THEPROLⅡrERATIONANDⅣmTHYLATIONREGULATEDBYB．ARRESTD寸1DiLEUKEⅣⅡA—INITIATINGCELLSFROMCHⅡ．DRENACUTELYM咿HOBLASTICLEUKEMIAABSTRACTobjectiVe：IIlourpreViousstudy，11i曲p—an．estiIll

7、eXpressionwasfouIldiIlleukemia—mitiat咄cells(LIC)of出ldrenacute驷phoblasticleul(emia(ALL)．Here，We胁her曲estigatethepotentialroleofp。锄restiIll(13Arrl)iIlLICprohf．eratiVecapac时砌y豇加and砌vf阳，toexploremeroleofp—arrestiIl1onDNAmeⅡ1ylation仃ansferase(DNⅣ盯s)，HOXa9，PTEN，P1

8、5genememyl舶na11dexpression，toeXploreⅡ1esyllergisticroleofp—a玎est矗11andmetllylation昀nsferase劬而itorsiIlALL-LICspml彘rationaIld1eukemogenesis．TheuhimateailnofmisstudyistoeXploreⅡ1e印igeneticmechallismsofp—a