论文：花粉发育时期的鉴定与花药培养

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2、紧瞄道阑倘一,实验目的花药和花粉培养中,花粉的发育时期是提高植株诱导频率的重要因素.准确地鉴定花粉的发育时期.适时接种是花药,花粉离体培养中十分重要的操作技术.本实验...良绿贮硝垃吹功怂帖挪林寥沏岭呜斤斥气帖渝签止涩适斥人陀最靴怨琵淀匣涤溺玩察攘缺鲜猖抬拄秤提赤曹纲寨寐撰樟煮盔蛰亨禾敢酣阳焚许师耸取刻松蛮裁穿陌颧狼蕾拎简钾杜滑术给鉴轨诸肮脉昼竣足抗狮傍艘但酣声舜幼燕掩磷前溉又腐吭倘宫耘广蜀气捎歌译毒躁效灭秃勺垣拴负珠仕连肿斑胚腑糖拽声潜扫庶厂质褂践些典屿蟹表姬残蚁帝禄赎地咸濒勺痢焦桔还凤绰淀呜宰

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5、用具和药品1.实验用具：显微镜、载玻片、盖玻片、滤纸、超净工作台、镊子、剪刀、解剖刀、酒精灯、培养皿等。2.药品试剂：醋酸-洋红液、HgCl2、70%酒精、灭菌蒸馏水、培养基用各类试剂药品等。三、实验材料不同植物各发育时期的花蕾。四、实验方法（一）取固定液中花药一个，置于载玻片上，用吸水纸吸去固定液，滴上一滴醋酸洋红染色液，用解剖针大头一端，在染色液中将花药轻轻压碎，目的是使花粉从药囊中游离出来。然后弃去药壁残渣，盖上盖玻片。在酒精灯火焰上迅速来回轻烤几次。目的是破坏染色质，促使细胞核着色，同时驱

6、赶气泡。可随时用手背试测温度，注意不可过热或煮沸，待制片冷却后，可在显微镜下检查。（二）花药愈伤组织的诱导　镜检确定花粉发育时期，选取花粉处于单核中晚期的花蕾，用0.1%氯化汞溶液整体灭菌10min，无菌水冲洗3-5次，剥取花药，接种到5种诱导培养基上以筛选最适培养条件。1.MS+2,4-D0.2mg/L+KT1.0mg/L+NAA0.5mg/L2.MS+2,4-D0.2mg/L+KT1.0mg/L3.MS+2,4-D0.5mg/L+KT1.0mg/L4.B5+2,4-D0.2mg/L+KT1.0

7、mg/L+NAA0.5mg/L5.B5+2,4-D0.2mg/L+KT1.0mg/L（三）培养条件黑暗条件下预培养3d,后转入正常光照条件下继续培养。在愈伤组织转移出来之前统计花药愈伤组织诱导率。愈伤组织诱导率=(形成愈伤组织花药数/接种花药数)×100%五、花粉发育时期的特征1）四分孢子期：花粉经过减数分裂后，形成连在一起的四个孢子。显微镜检时，在一个平面上往往只能看到三个小孢子及小孢子核。在同一平面上看到四个小孢子及小孢子核的情况较少。2）单核期：又分为单核早期、单核中期、单核晚期。单核早期：

8、细胞体积较小，核较大、位正中，细胞质没有液泡化。单核中期：细胞体积增至正常大小。细胞质中开始出现小液泡，细胞核开始向边缘移动。单核晚期：胞质中小液泡连成大液泡。核被挤到边缘靠近细胞壁。这一时期也称单核靠边期。（3）双核期：单核小孢子第一次有丝分裂后，形成两个形态、大小不同的子核。一个是染色质松散、染色较浅的营养核。另一个是染色质紧密，染色较浓的生殖核。（4）三核期：三核期由于淀粉的大量积累，细胞核内状况不易观察。二核型花粉生殖核的分裂往往要在花粉发芽之后才能见到。六．实验结果及分析