本标准通过规范饲料中尿素含量的测定方法

《本标准通过规范饲料中尿素含量的测定方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、DB××/T××××—××××黑龙江省质量技术监督局发布1.1.1.1　××××-××-××实施××××-××-××发布饲料中尿素含量测定—分光光度法DB23/T××××—××××DB23黑龙江省地方标准ICS65.020.30B43备案号：黑质技监函发[2009J183号]1DB23/T××××—××××前言本标准通过规范饲料中尿素含量的测定方法，达到测定饲料中尿素含量，诊断动物尿素中毒的目的。本标准由黑龙江省畜牧兽医局提出。本标准由黑龙江省质量技术监督局批准。本标准起草单位：东北农业大学本标准主要起草人：徐世文、

2、李金龙、张春红、李术、王伟IDB23/T××××—××××饲料中尿素含量测定技术规程1范围本标准规定了动物饲料中尿素含量的测定方法。本标准适用于对动物饲料尿素中毒的诊断。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T14699.1—1993饲料采样方法3原理利用尿素与对二甲氨基苯甲醛（DMAB）反应，在酸性乙醇溶液中反应，生成的黄色物质最大吸收波长为420

3、nm，根据朗伯—比尔定律，计算样品中尿素的含量。4仪器设备分光光度计：备有1cm和5cm比色杯。小型粉碎机。分析天平：感量0.1mg。振荡器。容量瓶：25mL、100mL、500mL、1000mL。烧杯：100mL、200mL、500mL。微量移液器：量程1mL-5mL。移液管：10mL。长颈漏斗。5试剂和溶液5.1对二甲氨基苯甲醛溶液：DMAB（分析纯）4.0000g，加10mL浓盐酸（分析纯），用无水乙醇（分析纯）定容至100mL，密闭避光室温保存。5.2乙酸锌溶液：乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O，分析

4、纯]22.0000g，加入3mL冰乙酸（分析纯），用蒸馏水定容至100mL。5.3亚铁氰化钾溶液：亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O，分析纯]10.6000g，加蒸馏水定容至100mL。5.4磷酸盐缓冲液（pH7.0）：将3.403g无水KH3PO4（分析纯）和4.355g无水K2HPO4（分析纯）分别溶于100mL蒸馏水中，合并此溶液用蒸馏水定容至1L。5.5尿素标准溶液：a）储备液：尿素的浓度为10mg/mL。准确称取5.0000（±0.0001）g尿素（分析纯），用蒸馏水定容至500mL。b）工作液Ⅰ（尿

5、素的浓度为1.0mg/mL）：取10mL储备液，用蒸馏水定容至100mL。3DB23/T××××—××××c）工作液Ⅱ（尿素的浓度为0.2mg/mL）：取10mL储备液，用蒸馏水定容至50mL，再取此液10mL，用蒸馏水定容至100mL。5.6活性炭：化学纯或分析纯。6试验样品6.1饲料采样方法：GB/T14699.1—19936.2样品处理：精确称取粉碎至20目左右的样品m（±0.0001）g，置于锥形瓶中，加入1g活性炭，加蒸馏水约80mL，充分振荡，分别加入5mL乙酸锌溶液和5mL亚铁氰化钾溶液，用蒸馏水定容至

6、100mL，充分振荡，并放置30min，用中速滤纸过滤，取滤液进行试验，同时做试剂空白。7标准曲线绘制7.1样品尿素含量在1％以下：分别取浓度为0.2mg/mL的尿素标准液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、7.00、10.00mL（即尿素标准液终浓度分别为0、0.08、0.016、0.024、0.032、0.04、0.056、0.08mg/mL），加入5mL磷酸盐缓冲液，再加蒸馏水使总体积至18mL左右，然后分别加入5mLDMAB显色液，用蒸馏水定容至25mL，摇匀，室温下放置20min，以

7、磷酸盐缓冲液为参比，在420nm波长下，将测定液和空白参比液用5cm比色池，测定吸光度，以吸光度为纵坐标，尿素含量为横坐标绘制标准曲线，计算出相关系数R2，要求R2>0.99。7.2样品尿素含量在1％以上：分别将标准液浓度改为1.0mg/mL，比色池改为1cm，其他同7.1。8操作步骤取滤液估测尿素含量，当样品尿素含量在1％以下，取液量V为15mL，在1％以上取液量V为5mL，加入5mL磷酸盐缓冲液，再加蒸馏水使总体积至18mL左右，然后分别加入5mLDMAB显色液，用蒸馏水定容至25mL，摇匀，室温下放置20min

8、，以不含样品的滤液为试剂空白，在420nm波长下，将测定液和试剂空白液用5cm比色池，在标准曲线上由吸光度查得尿素含量，通过计算，即得试样的尿素含量C1和试剂空白的尿素含量C2。9结果计算样品中尿素的含量计算公式：X=（C1-C2）mV11000××（C1-C2）mV100=×10mL×25mL100mL×1××25mL×式中：X——样品中尿素