实验六薄层色谱仪分离鉴定huc-5粗提物

《实验六薄层色谱仪分离鉴定huc-5粗提物》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、实验六薄层色谱仪分离鉴定HUC・5粗提物一实验目的通过卡玛薄层色谱仪分离HUC-5粗提物的实验，了解薄层色谱分离方法的原理及薄层色谱仪的大致结构；掌握使用薄层色谱仪的及其相关软件的方法。二实验原理将HUC-5粗提物采用半自动上样法，借助于混合物中的组分，在互不相容的组分件进行吸附或分配，以达到分离的目的。三仪器与药品瑞士卡玛(CAMAG,Switzerland)构造如下(本实验室薄层色谱仪包含除6Z外的所有部件)。实验室提取HUC-5粗提物，石油釀：乙酸乙酯：甲醇=5：1：0.9o四实验方法及操作步骤1.薄层板使用前先活化，

2、如有特殊要求，还应预洗。活化方法：将硅胶板移入烘箱，缓慢升温至105-110°C恒温活化半小时，取出放入干燥器中备用。2.点样点样是平面色谱屮最重要的步骤，点样过程中产生的误差无法通过色谱展开和计算来校正。本设备釆用喷雾点样，条带状等多种方式点样。其中条带状点样适合中药分析。从左到右两个一组分别为手动点状点样、険驾点状点样.手动条带状点样、隋驾式条带状点样，带状点样，带宽8-10mm(TLC),5~8mm(HPTLC),高度不超过1mm■点状点样，直径一般不大于3mm(TLC)・采用接触式时尽■不要损伤薄层板■定■点样.提高

3、样品色谱和对照药材色谱可比性■点样时应注意选择适宜的涪剂。样品的涪解度、溶液粘度等均会对点样质■产生影响。3.展开展开式薄层色谱中受影响因素最多的步骤，展开剂的选择、不同展开方式、温度、展开距离对成分分离的影响。其中展开湿度的影响值得重视且较难控制。饱秘预平衡对色谱展开辦湿度对Rf值的影响H开朋22min17min13min展开补二■乙烷甲(50:10:10:2)本实验室使用的为全白动展开系统全自动展开系统ADC2平面色卞用标准化的展开条件在传统玻璃层析缸中进行全自动色谱展开。■全自动■饱和度控制■湿度控制(15%〜85%)

4、■可进行IQ/OQ验证■无与伦比的重现性I不同照明模式下的成像的比较（a）UV254nm下春黄葡油的HPTLC指纹图谱（左：F254,右*F254S）:（b）用NP试剂衍生化后在UV366nm下山楂的HPTLC指纹图谱（左:有滤光片.右：无濾光片）；（c）茴香醛试剂衍生化后在可见光下舂黄菊油的HPTLC指纹图谱（左：反射.中；反射+透射.右：透射）O4.色谱后衍生化本实验室使用的薄层色谱仪器带热激发反应，可短时间内将展开板进行烘干。5.图谱记录和评价TLCVisualizer薄层色谱记录系统■*位高线性高分辨率工业CCD■高

5、重现性（固定焦距光圈）■60KHZ高频光源■高级图像増强算法■曝光可达10S■增强的254nm、366nm和白光直射/透射组合■图像定量功能（可选）该系统优点：曝光时间自动侦测、曝光时间课手动调节、专业图像增强一图像校正、专业图像增强一空白板背景扣除。五软件设定/导入双击软件一A设定参数->新建—1.点样器2.展开器爼3.观察器1.点样器设置：进入Linomat5General界►调整Sequence.defaults►进入Sequence界面（调整NumberoftracksBandlength、点样位置x,y轴、样点间隔

6、、点样量、点样顺序等等）1.展开器设置：新建——►进入界面设定参数（预饱和时间、预饱和液所需体积、展开剂体积、展开距离、吹干体积）一►开始一A提示加预报和液一►加预饱和液过程屮加展开剂——A展开完毕，待吹干、取出、放入观察室2.观察设置：新建一►选择所需要用观察光，如“254nm,360nm,R,T,RT等一~点击将要观察所需的光照条件一►点击开始拍照一►拍照完成。六实验结果七作业和思考题1.展开剂的选择条件2.整理该仪器使用过程中的注意事项