倏逝波光纤免疫传感器btv抗体检测方法的建立

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1、广西大学硕士学位论文倏逝波光纤免疫传感器BTV抗体检测方法的建立姓名：靖培培申请学位级别：硕士专业：基础兽医学指导教师：黎宗强20120628倏逝波光纤免疫传感器BTV抗体检测方法的建立摘要蓝舌病作为一种世界动物卫生组织(OIE)必须上报的烈性动物传染病，主要危害牛、羊等家畜，在世界范围内广泛流行。国际组织和各国政府均将蓝舌病列为动物疫病监测和防控的重点，对动物和动物制品国际间贸易具有非常重要的影响。目前，世界各国尚无有效的蓝舌病疫苗和防治措施，只能以免疫监测为主，因此，建立一种快速、灵敏、方便、特异性强的BTV检测方法就变得尤为重要。倏逝波光纤免疫传

2、感器是将倏逝波原理、荧光免疫分析原理及光纤检测结合于一体的检测装置，具有特异性强、灵敏度高、检测速度快、操作简便等优点。因此，在爆炸性物品检测、环境监测、毒品和滥用药品检测、临床疾病监测、食品卫生监测及生物学检测等领域具有广泛的应用前景。本研究利用BTVVP7单克隆抗体和BTVVP7蛋白(均为本实验室制备)，进行BTV抗体倏逝波光纤免疫传感器检测方法的研究。用BTVVP7蛋白作为光纤包被抗原，VP7单克隆抗体作为检测样品，Cy3标记的羊抗鼠IgG抗体作为检N-抗，进行BTV抗体倏逝波光纤免疫传感器检测方法的建立。本研究借鉴ELISA常用的棋盘法，对光纤

3、包被VP7蛋白浓度和Cy3标记抗体浓度进行优化，结果证实VP7蛋白最佳包被浓度为150gg／ml，Cy3标记抗体的最佳实验浓度为20lxg／ml。经过初步优化，得到的VP7单克隆抗体检测下限为10ng／ml。另外，在实验后期对检测步骤进行了优化，将原来的两步法改为一步法，不仅简化了检测步骤，还缩短了检测时间，使此检测方法更加简便、迅速。在倏逝波光纤免疫传感器检测实验中，光纤再生问题一直难以解决。本研究用甘氨酸一HCI缓冲液(pH2．O)、TEA溶液(pH11．5)和O．5％的SDS(pH1．9)溶液进行光纤的再生，结果显示TEA溶液(pH11．5)的再

4、生效果最好，可以再生至少10个循环；甘氨酸．HCl缓冲液(pH2．O)可以再生6个循环；而O．5％的SDS(pH1．9)溶液只能再生2个循环。因此，在本实验中选用TEA溶液作为光纤再生液。最后，将此检测方法与目前常用的BTv抗体检测方法—ELISA方法进行比较，对此方法进行性能评价。关键词：蓝舌病毒倏逝波光线免疫传感器优化实验光纤再生ESTABLISHENTOFN匝THODONDETECTIONOFBTVANTIBODYMTHEVANESCENTⅥ俏LVEFIBEROPTICINm仉JNOSENSORABSTRACTBluetongue，asakind

5、oftheworldorganizationforanimalhealth(OIE)mustbereportedtoaviolentanimalinfectiousdisease，themainharmofcattle，sheepandotherdomesticandwildruminants，intheworldscopewidelypopular．Intemationalorganizationsandgovernmentsaretobebluetongueanimalepidemicpreventionandcontrolandmonitorin

6、gasthekey,inanimalsandanimalproductsintemational打adehasveryimportantinfluence．Atpresent，allcountriesintheworld，therearenoeffectivebluetonguevaccinesandpreventionandcontrolmeasures，Canwithimmunemonitoringprimarily,therefore，establishingarapid，sensitive，convenient，specificstrongBT

7、Vdetectionmethodisparticularlyimportant．Evanescentwavefiberopticimmunosensor(EWFI)isevanescentwaveprinciple，fluorescenceanalysisprincipleandimmuneopticalIIItestingcombinedinoneofthedetectiondevice，bespecifictothestrong，highsensitivity,thedetectionspeed，simpleoperation，etc．Theref

8、ore，intheenvironmentalmonitoring，clinicaldiseas