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1、条斑紫菜赤腐病病原学探究摘要：条斑紫菜是红藻门的代表性物种之一，具有重要的经济价值。但近年来，随着条斑紫菜栽培规模的持续扩大，病害发生的频率、规模和危害程度也逐年增加。本研究对紫菜腐霉的生长特性进行研究，发现其在温度28°C,盐度为20%o时生长速度最快。此外，对感染的叶片进行了病原学的研究。对条斑紫菜病害进行病原学和致病条件的研究，不仅可以为制定病害防治措施提供依据，而且也将为抗病品系的筛选提供条件。关键词：条斑紫菜；赤腐病；紫菜腐霉【分类号】：S968.4一、背景介绍条斑紫菜是一些独特的海洋藻类，且易通过它们的丝状体或叶状体被辨别。主要分布于南半球和北半
2、球寒冷的北方海岸［1,2］。条斑紫菜的人工栽培产业是世界上商业价值最重要的海藻栽培产业，其中紫菜年总产值近20亿美元，中国、韩国和日本每年紫菜栽培产业的总产值已经达到14亿美元以上［3］。近年来，我国条斑紫菜产业发展迅猛，栽培产量逐年增加，居世界第一位。随着养殖规模的扩大紫菜病害每年都有不同程度的发生，这些病害对紫菜产值造成严重影响。赤腐病是严重危害条斑紫菜的一种病害，1947年日本的新崎盛德首先报导了赤腐病［4,5］,1970年由高桥实等鉴定病原菌为腐霉属新种-紫菜腐霉（Pythiumporphyrae）［6］□目前关于赤腐病的研究热点主要集中在抗紫菜腐霉
3、蛋白的分离纯化［7］。本实验研究赤腐病的致病机理以及发病过程，对条斑紫菜病害进行病原学和致病条件的研究，不仅可以为制定病害防治措施提供依据，而且也将为抗病品系的筛选提供条件，对高产抗病品系的筛选有着不容忽视的应用价值。二、材料与方法（一）材料来源健康的条斑紫菜叶片来自于实验室自由丝状体培养而成的，叶状体培养条件为：温度15°C,盐度28%o-29%o,光照强度5&1ymol/m2•s-62.5nmol/m2•s,光暗周期12L：12D,每五天换一次培养基并充气培养。紫菜腐霉菌株购自于日本生物资源库。（二）紫菜腐霉的培养紫菜腐霉在玉米粉琼脂固体培养基［7］上进
4、行划线培养，温度20°Co菌丝扩大培养时，刮取-一小块经纯化的腐霉菌丝块置于谷氨酸钠液体培养基［8］中，20°C,100r.min-lo（三）不同培养条件对紫菜腐霉菌丝体生长的影响将在固体培养基上生长5天的菌丝接种到液体培养基中，置于4°C-36°C（pH=7.5,盐度为18%。，每隔41设一个梯度）和盐度为5%。-50%0（pH=7.5,温度为20°C,每隔5%。设一个梯度）的恒温培养箱中，每个实验组梯度设置3个平行，每组最初起始重量为lmg（湿重）。一周后测量每个实验组的菌丝体重量。（四）人工感染实验及观察将在液体培养基中生长5天的菌丝体用灭菌海水冲洗三
5、次，并用消毒的卫生纸稍微把水吸干。称取2g菌丝（湿重）置于装有200ml灭菌海水的锥形瓶中，制成终浓度为lg/100ml的菌丝体悬液，每组锥形瓶中放入5片健康的紫菜叶片，同时设置3个重复。此外设置一组无添加菌丝的作为对照，同时设置3个重复。将对照组和实验组置于光照培养箱中，温度15°C,盐度29%o,光照强度58.1umol/m2-s-62.5umol/m2-s,光暗周期12L：12D。将对照组和实验组患病的叶片，切取正常的和患病部位叶片组织，利用OlympusCX31型显微镜观察病斑部位并做记录。三、结果（一）不同培养条件对紫菜腐霉菌丝体生长的影响由表1可
6、知，在液体培养基中生长一周后，紫菜腐霉菌丝体在16-361的温度范围内生长良好，菌丝体最适生长温度为28°C,重量达到了346.6mg,其次是24°C,重量为256.9mgo经统计学方差分析，2（TC和36工之间的菌丝体重量有显著性差异（P（二）人工感染实验浓度为lg/100ml的菌丝体悬液加到紫菜培养液后，2天后出现病症。肉眼观察可以发现，病斑在藻体上出现的位置不定，叶状体的梢部、中部和基部都可以看到病斑的存在，梢部出现的病斑稍微多些。初期病斑仅为一个小锈红色斑点，病斑形状多为亚圆形或圆形，大小不同，大的可达2厘米以上，小的可到1毫米之下。多数斑点开始时仅
7、为肉眼依稀可辨的大小，之后相互愈合连成一片。随着病情的加重，锈红色斑点逐渐变为黄绿色或淡黄色（图3-A）,边缘有时稍带红色。之后大大小小的的斑点相互愈合连成一片，最后叶片颜色基本全变为绿色（图3-B）,并开始出现烂洞现象，直至最后腐烂流失，从病症出现到整个叶片腐烂流失仅需要5-7天。图3感染赤腐病的紫菜叶片（三）发病进程的显微观察光学显微镜下观察发现，出现病症的叶片出现大小不同的病斑（图4-A,图4-B）,病斑处的紫菜细胞被菌丝体贯穿,这是赤腐病最显著的特征。在紫菜细胞被感染过程中，开始只有1个细胞被菌丝体穿透，和正常紫菜细胞（图4-C）比较，发生病害的细胞
8、已经萎缩，颜色也加深，并且菌丝体继续伸长侵染临近的细
