人参皂苷rh1改善糖皮质激素抵抗的实验研究

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1、第二军医大学硕士学位论文人参皂苷Rh1改善糖皮质激素抵抗的实验研究姓名：李俊申请学位级别：硕士专业：中西医结合临床指导教师：凌昌全201205人参皂苷Rhl改善激素抵抗的实验研究卅古J；<背景：糖皮质激素(Glucocorticoids，GC)是目前临床应用较多的一类药物，广泛用于炎症及免疫相关疾病的治疗，但是临床上有相当一部分病人的激素疗效并不理想。由于GC的药理作用丰要是通过糖皮质激素受体(glococorticoidreceptors，GR)介导发挥的，因此有研究认为GR的表达及其结和力是GC疗效的决定因素之一。如果GR表达

2、或结合力处于一种较低的状态，即使体内GC水平很高，实际能与GR结合形成配体受体复合物的GC数量却有限，故激素的牛物效应仍然较低。我课题组研究发现，出现激素抵抗的系统性红斑狼疮病人外周血单个核细胞GR的表达及结合力就明显低于激素敏感的病人。对于这部分病人，通常采用补充大剂量糖皮质激素，或者给予免疫抑制剂联合治疗的方法提高其疗效。然而，大剂量GC和免疫抑制剂的使用可以引起各种副作用的发牛。而且长期大剂量应用激素又会进一步导致GR表达减少和结合力降低，从而加大后续治疗的难度。因此，寻找一种有效调节GR的药物一直是近年来研究的热点。近年来

3、，中药在临床治疗中的地位越来越受到重视，我科室在前期研究中发现人参中丰要有效成分厶叁!垫皇萱(gi堕星塑!i鱼星墨!QS苎2垄签凼皇}县查土调QB：羞增强激素效应的作用。随后的临床研究也证实，GSS可以增强系统性红斑狼疮的糖皮质激素疗效，在不影响疗效的前提下有助于GC的减量。但是总皂苷成份复杂，包含了Rbl、Rb2，Rb3，Rc，Rd，Re，Ro，Rf，Rgl，R92，R93，Rhl，20(S)一Rh2，20(R)·Rh2，F1、F2等40余种单体皂苷，不利于临床推广和机制研究。固些!奎亟窒整丛!垫皇萱虫短丝出二登墓且弛县直±塑鱼

4、B佳旦笪：望签!麴塞墓垄笠凼窆}盟擅麈亟邀盍抵拉笪改善作用，并做初步机制探讨。本科题研究目的：1、从成分复杂的GSS中筛选能够上调GR表达和结合力的一种或几种单体，并筛选出上调效果最强的单体；2、以地塞米松(dexamethasone，Dex)作为阳性对照，观察该单体在体内外对糖皮质激素抵抗的炎症模型的作用，并对其机制做初步探讨。本课题采用的方法：1．采用Western．Blot、定量RT-PCR法筛选具有上调GR表达的单体，并运用放射性配基结合实验检测其对GR结合力的上调作用。2．体外观察Dex联合人参皂苷单体的抗炎作用，并初步

5、探讨其分子机制。(1)我们先用Dex(1uM)联合人参皂苷单体(10uM)及单用Dex(1uM)预处理细胞2h(短期作用组，非激素抵抗模型)或者24h(长期作用组，激素抵模型)，再用TNF．a干预8h，然后运用定量RT-PCR技术检洲炎症因子IL．6、IL．17、MMP．1、第二军医大学硕士学位论文TNF．0tmRNA的表达，对比Dex联合人参皂苷单体与单用Dex在不同条件下的抗炎效果。(2)为了探讨Dex联合人参皂苷单体优于单用Dex的抗炎机制是否与NF．r,B通路有关，我们设立短期作用组(2h)及长期作用组(24h)，TNF-

6、0c干预，相同条件下，采用Western．Blot技术观察其抗炎作用是否通过影响P65通路发挥。(3)因为人参皂苷单体能够抑制GR蛋白表达及结合力的下调，我们运用双荧光素酶报告基因法观察其是否增强GRE的转录激活。同时用Dex联合人参皂苷单体及单用Dex处理肝原代细胞，观察GR的数量及结合力的提高是否会激活与高血糖相关的酶，因此我们运用定量RT-PCR法检测糖异生相关基因G一6-P、PEPCK，观察其是否处于高表达状态。3．DBA．1关节炎症模型小鼠验证所选单体的体内抗炎效果。牛II型胶原与完全弗氏佐剂混合物诱导关节炎模型，将模型

7、小鼠随机分组分成生理盐水(Nerative)组、Dex(1．5mg／kg·d)组、Dex(1．5mg／kg‘d)+l让l(25mg／kg‘d)组，连续给药14天。每天观察小鼠关节炎症反应情况，并给予评分，治疗结束后观察血糖，定量RT．PCR法检测GR、G．6．P、PEPCK的表达。结果表明：1．人参总皂苷中三个单体Rhl，Rbl，Rb3具有抑制GR表达和结合力下调的作用，其中Rhl作用最为明显；2．体外研究显示，人参皂苷Rhl与Dex联合应用对TNF．c【诱导生成的炎症因子IL．6、IL一17、MMP一1、TNF．仅mRNA表达具

8、有明显的抑制作用(尸