鸡新城疫卵黄抗体的提取工艺及应用研究

《鸡新城疫卵黄抗体的提取工艺及应用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北农业大学硕士学位论文鸡新城疫卵黄抗体的提取工艺及应用研究姓名：薛晓阳申请学位级别：硕士专业：基础兽医学指导教师：董世山20120531摘要IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIllllllllllY2143260本试验目的是研究简便快速提取纯化卵黄抗体的生产工艺，适用于大规模生产。卵黄抗体的提取主要就不同浓度泊洛沙姆法、不同浓度PEG6000法、水稀释法和冻融法相结合进行比较，检测提取上清液抗体效价、去脂率等指标。应用冷冻干燥方法浓缩卵黄抗体，比较冷冻干燥前后和不同倍数浓缩后产品抗体效价的变化。通过饱和硫酸铵纯化卵黄抗体，主要就50％、33％、33％路线纯

2、化卵黄抗体，HI测定纯化前后抗体效价的变化，紫外分光光度计测定蛋白含量的变化；SDS—PAGE分析各组提取的卵黄抗体纯化后有无差异。选取母源抗体接近消失的60日龄公鸡随机分成试验组和对照组，试验组肌肉注射卵黄抗体，剂量为2ml，试验用卵黄抗体包含新城疫抗体、禽流感H5亚型、禽流感H9亚型抗体，研究机体肌肉注射卵黄抗体对血清抗体效价的影响。选取新城疫抗体水平为阴性的公鸡随机分为6组：预防组、自愈组、低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组、对照组，通过新城疫病模型试验研究肌肉注射卵黄抗体的治疗效果。预防组在接毒前后2天肌肉注射2ml抗ND卵黄抗体；自愈组不做任何治疗

3、；治疗组接毒72h后开始连续治疗3天；低剂量组每天肌肉注射lml；中剂量组2mll高剂量组4ml；对照组注射生理盐水。试验结果如下1．1．O％泊洛沙姆法上清液微黄，沉淀结实易分离；3．5％PEG6000和1：10水稀释法上清液清澈，但沉淀不结实，不易分离。以氯仿提取法得到的卵黄抗体为标准，1．O％泊洛沙姆法上清液效价比氯仿提取法得到的卵黄抗体低1．2个HI效价滴度，3．5％PEG6000法上清液效价比氯仿提取法抗体效价降低3个HI抗体滴度。1：10水稀释法上清液效价比氯仿提取法抗体效价低了4．5个HI抗体滴度；因此1．0％泊洛沙姆法提取抗体效价较高，结合冻融法可以

4、进一步去脂，减少了后期浓缩的工作量，符合大规模提取要求。2．卵黄抗体纯化结果饱和硫酸铵可以有效的纯化卵黄抗体，各组纯度差异不大，电泳分析主要以66KD条带为主，抗体效价上升2．3个滴度，蛋白含量明显上升，表明卵黄抗体可以用此方法纯化。3．卵黄抗体浓缩结果冷冻干燥可以有效浓缩卵黄抗体产品，冷冻干燥前后原倍稀释抗体活性滴度一致，5倍浓缩产物上升2个HI抗体滴度，10倍浓缩产物上升5个HI抗体滴度，说明冷冻干燥可以明显提高卵黄抗体产品效价。4．肌肉注射卵黄抗体对鸡血清抗体效价的影响检测到注射后1—8天，试验组血清各个时间点的新城疫抗体水平均极显著高于与对照组(P

5、1)；注射后1．11天，试验组血清禽流感H5亚型抗体水平均极显著高于对照组(P<0．01)；注射后1．14天，试验组血清禽流感H9亚型抗体水平均极显著高于对照组(尸

6、泊洛沙姆结合冻融法适合于大量提取卵黄抗体1．0％泊洛沙姆可以减少卵黄稀释倍数，减少后续工作，且在试验组中上清液效价最高；冻融法可以进一步去除卵黄抗体产品的含脂量，简单易行，两种方法联合应用适合大规模生产。2．重复饱和硫酸铵法能有效纯化卵黄抗体饱和硫酸铵法可以有效去除卵黄抗体中的杂蛋白，抗体滴度和蛋白含量得到了明显升高，在4种方法得到的卵黄抗体纯化后纯度无太大差异。3．冷冻干燥法适用于浓缩卵黄抗体冷冻干燥对卵黄抗体效价活性没有影响，浓缩产物抗体效价上升，效果明显。4．抗NDV卵黄抗体对鸡新城疫病具有显著的防治作用试验动物新城疫抗体为阴性，结果预防保护率为95％，治疗

7、组比自愈组死亡率明显降低，保护率提高了30％．55％，表明肌肉注射卵黄抗体对新城疫的治疗效果明显。关键词：鸡；卵黄抗体；提取；纯化；浓缩；应用StudyontheExtractMethodsandApplicationofChickenNewcastleDiseaseEggYolkAntibodyMasterCandidate：XueXiaoyangSpecialty：BasicVeterinarySciencesAdvisors：ProfessorDongShishanAbstractTheaimofthispaperistoimprovetheprocesso

8、feggy