鳜三种生长抑素与两种受体cdna全长克隆及组织表达分析

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1、学校代码：10264研究生学号：M090107267上海海洋大学硕士学位论文鳜三种生长抑素与两种受体cDNA全长克题目：隆及组织表达分析Cloningandexpressionanalysisofthree英文题目：somatostatinsandtwosomatostatinreceptorsinSinipercachuatsi专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：水产动物遗传育种姓名：代威指导教师：赵金良教授二O一二年五月六日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的

2、成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保

3、密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注李思发上海海洋大学教授主席崔映宇上海海洋大学副教授委员中国水产科学院东海来琦芳教授委员水产研究所颜标上海海洋大学讲师秘书水产与生命学院答辩地点答辩时间2012-5-25C217上海海洋大学硕士学位论文鳜三种生长抑素与两种受体cDNA全长克隆及组织表达分析摘要生长抑素（somatostatin,SS）是脊椎动物生长发育的主要负调控因子之一，属于多基因家族，它们通过与生长抑素受体（somatostatinreceptor,SSTR）结合，参与生长

4、激素-胰岛素样生长因子-Ⅰ（GH-IGF-Ⅰ）生长轴的多水平调节，从而介导生物体的生长发育。本论文利用cDNA末端快速扩增法（RACE）克隆了鳜（Sinipercachuatsi）脑组织中3种生长抑素前体（preprosomatostatin,PSSⅠ、PSSⅡ和PSSⅢ）cDNA全长序列。结果显示，鳜PSSⅠcDNA全长647bp，包含开放阅读框（ORF）369bp，共编码122个氨基酸，前26个氨基酸为信号肽，C端SS-14在脊椎动物中非常保守；PSSⅡcDNA全长655bp，开放阅读框387bp，编码128个氨基酸，710前25个氨基酸为信号肽，C端带有[

5、Tyr,Gly]SS-14；PSSⅢcDNA全长823bp，开放阅读框333bp，共编码110个氨基酸，前21个氨基酸为信号肽，C端带有2[Pro]SS-14。利用RT-PCR技术检测了鳜PSSmRNA的组织表达特征，3种PSSmRNA均在脑组织中表达，PSSⅠmRNA在其他组织中未见表达，PSSⅡmRNA在食道和胃中大量表达，PSSⅢmRNA在肾和性腺中大量表达。推测3种PSS除一致参与中枢神经激素调控外，PSSⅡ还参与消化作用调控，PSSⅢ参与调控生殖作用。对脑组织原位杂交分析表明，PSSⅠmRNA在下丘脑和延脑中表达，PSSⅡmRNA在下丘脑中表达，PSS

6、ⅢmRNA在下丘脑、视觉盖、延脑和脊髓中均有表达。3种PSS均在下丘脑表达，进一步表明它们可参与神经内分泌中心调节。在其他脑区的表达差异，推测不同生长激素还参与其他神经生理调控和发育调节，兼有其他生物学效应。在获得三种生长抑素基因的基础上，利用RACE技术进一步克隆获得了鳜脑中2种生长抑素受体（SSTR2和SSTR3）cDNA全长序列。鳜SSTR2cDNA全长1820bp，含开放阅读框1146bp，共编码382个氨基酸；SSTR3cDNA全长1874bp，含开放阅读框1458bp，共编码486个氨基酸。SSTR由5个部分组成：N端区域、I上海海洋大学硕士学位论文

7、7个转膜区（TMD）、3个细胞外袢（ECLs）、4个细胞内袢（ICLs）和C末端区域。NJ系统进化树结果显示，鳜SSTR2和SSTR3分别形成相对独立的分支，两者氨基酸序列相似度为51.2%，表明它们是由不同基因编码而成。利用实时荧光定量RT-PCR技术检测了SSTR2和SSTR3mRNA的组织表达特征，它们均在多种组织中广泛表达。其中，SSTR2mRNA在肝脏中表达量最高，其次是脑、脾脏、性腺和幽门垂，心脏、食道、胃、肠道中表达量较低。SSTR3mRNA在胃中表达量最高，其次是脑、食道、肾和性腺，鳃和幽门垂中表达量较低。SSTR2和SSTR3mRNA均在脑中表

8、达，与三种PSS均在脑中