纳洛酮对细菌内毒素脂多糖诱导的视网膜小胶质细胞激活的抑制作用及相关机制的研究

《纳洛酮对细菌内毒素脂多糖诱导的视网膜小胶质细胞激活的抑制作用及相关机制的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、夜贫A#硕士学位论文纳洛酮对细菌内毒素脂多糖诱导的视网膜小胶质细胞激活的抑制作用及相关机制的研究InhibitoryEffectofNaloxoneonlipopolysaccharide(LPS)-InducedRetinalMicroglialActivationandtheUnderlyingMechanism硕士研究生:徐一帆专业:眼科学导师:姜春晖副教授导师组成员：吴继红副研究员倪颖秦主治医师复旦大学附属眼耳鼻喉科医院2012年4月10日英文缩写词表缩写词英文全称中文RPRetinitisPig

2、mentosa视网膜色素变性AMDAge-relatedMacularDegeneration年龄相关性黄斑变性MGMicroglia小胶质细胞TNF-aTumourNecrosisFactor-a肿瘤坏死因子IL-lpInterleukin-ip白介素ipMAPKMitogen-ActivatedProteinKinase丝裂原激活蛋白激酶ERKExtracellularSignal-regulatedKinases细胞外调节蛋白激酶JNKc-JunAmino-terminalKinasesc-Jun氨

3、基末端激酶CNSCentralNervousSystem中枢神经系统ADAlzheimer'sdisease阿尔茨海默病PDParkinsondisease帕金森氏病MSMutiplesclerosis多发性硬化LPSLipopolysacchariders脂多糖PTXPertussisToxin百日咳毒素目录中文摘要1英文摘要2mm3材料和方法5親11舰13图表数据16参考文献2429已发表文章39致谢40复旦大学硕士学位论文纳洛酮对细菌内毒素脂多糖诱导的视网膜小胶质细胞激活的抑制作用及相关机制的研究中

4、文摘要【目的】本研究旨在证明，纳洛酮（naloxone)在体外可以抑制细菌内毒素脂多糖（LPS)诱导的视网膜小胶质细胞的活化，并减少后者分泌的肿瘤坏死因子(TNF-a)和白介素IP(IL-ip)。并且进一步阐述，上述作用是通过抑制p38MAPK这一通路实现的。【方法】将SD大鼠的视网膜小胶质细胞分离纯化培养。用不同浓度的LPS处理，建立小胶质细胞体外激活模型。不同浓度的naloxone(0.5p.M,1.0

5、iM和2.OhM)在LPS激活视网膜小胶质细胞前，预处理30分钟。利用ELISA检测胶质细胞培养上

6、清中TNF-a和IL-ip的分泌量。利用westemblot方法，检测细胞中MAPK通路家族中三个亚家族p38MAPK,ERK,JNK,以及他们活化的形式磷酸化p38MAPK(P-p38)，磷酸化ERK(P-ERK)，磷酸化JNK(P-JNK)这六种物质的含量。通过免疫荧光的方法，标记OX42(小胶质细胞特异性标记物）和P_p38。利用p38MAPK特异性的抑制剂，SB203580(不作用于ERK,JNK.通常被用来排除p38MAPK的作用）预处理视网膜小胶质细胞12小时，之后再进行上述naloxone预

7、处理，LPS激活这些步骤。利用ELISA再次检测上清液中TNF-a和IL-lp的分泌量，来反向验证我们的推论。【结果】实验证明naloxone可以减少LPS诱导的TNF-a和IL-1(3释放，并呈浓度-效应关系。Naloxone可以有效的减少p38MAPK的磷酸化，而对于ERK，JNK的磷酸化并无作用。对于SB203580处理后的小胶质细胞，naloxone的预处理则不能改变LPS诱导的TNF-ct和IL-1P释放增加。【结论】Naloxone可以抑制小胶质细胞激活和释放炎性因子，这一现象可能是通过对p3

8、8MAPK通路实现的。【关键词】小神经胶质细胞；纳洛酮；脂多糖类；神经保护剂；丝裂原激活蛋白激酶类【中图分类号】R774.1复且大学硕士学位论文InhibitoryEffectofNaloxoneonlipopolysaccharide(LPS)-InducedRetinalMicroglialActivationandtheUnderlyingMechanismAbstractPurpose:Toinvestigatetheeffectsofnaloxoneonlipopolysaccharide(LP

9、S)-inducedretinalmicroglialactivationandtheunderlyingmechanism.Methods:PrimaryculturedmicroglialcellswereisolatedfromtheretinasofSprague-DawleyratsandactivatedLPS;intheexperimentalgroupsthecellsweretreatedwithvariou