混合物铜(ⅱ)-2-巯基苯并噻唑的体外抗肿瘤作用及其机制的研究

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1、广州医学院2009级硕士研究生学位论文混合物铜（II）-2-巯基苯并噻唑的体外抗肿瘤作用及其机制的研究专业名称：病理学与病理生理学学位申请人：管利霞指导老师:刘金保教授本课题受国家863项目资金资助（2006A102Z4B5）广州医学院2012年6月目录中文摘要.............................................3英文摘要.............................................7前言..............................................12材料与方法..................

2、........................14实验结果.............................错误!未定义书签。讨论...............................错误!未定义书签。结论..............................................35附图...............................错误!未定义书签。参考文献.............................错误!未定义书签。中英文对照词表.......................................1综述.......

3、........................错误!未定义书签。致谢..............................................14学位论文原创性声明..................................15学位论文知识产权权属声明............................15关于学位论文使用授权的说明..........................15混合物铜（II）-2-巯基苯并噻唑的体外抗肿瘤作用及其机制的研究硕士研究生：管利霞导师：刘金保教授中文摘要背景与目的蛋白质是一切生命的物质基础，是机体细胞的重要组成部分，而所有的

4、蛋白质几乎都处于不断地合成和降解的动态平衡之中。其中蛋白质的降解主要有2种途径：第一是溶酶体途径，它主要负责细胞外的蛋白质和膜蛋白的降解；第二是泛素-蛋白酶体途径，而它是主要负责真核细胞内绝大多数蛋白质的降解，并且能够快速、有序、特异、单向参与细胞体内许多重要的生理生化过程(如细胞增殖，分化，凋亡，DNA修复、细胞周期的运转、蛋白的跨膜定位等)。泛素-蛋白酶体通路的异常和机体的多种疾病相关，其中（如致癌基因蛋白/生长促进因子，CyclinB和HIF等的降解受阻或者抑癌基因蛋白P27和P53的降解加速使细胞生长失控）可以促使肿瘤的发生。该领域的研究引起了全世界的关注，研发有效的和特异的调控蛋白酶

5、体的药物，成为抗肿瘤药物的新靶点。近年来的研究发现,某些金属配合物能够较强的抑制肿瘤细胞中蛋白酶体活性并能诱导肿瘤细胞凋亡，而且对永生化的正常细胞无毒性作用。这为临床上研发新型的蛋白酶体抑制来抗肿瘤开辟了新的道路。本实验通过研究二巯基苯并噻唑与铜（II）盐以2:1比例混合在不同肿瘤细胞系上诱导细胞凋亡及影响凋亡的因素来初步探讨抗肿瘤作用与蛋白酶体之间的关系，以及筛选出螯合剂二巯基苯并噻唑与金属离子铜形成配合物的最佳配比。实验方法（一）体外抗肿瘤作用及其影响因素1细胞增殖检测。MTS法2细胞死亡检测（1）AnnexinV-FITC-PI流式细胞术（2）荧光显微镜活细胞动态监测系统3检测死亡相关蛋

6、白变化情况Westernblotting4蛋白酶体活性检测细胞内蛋白酶体酶活性的检测（二）抗肿瘤作用与蛋白酶体功能关系的研究1蛋白酶体活性检测细胞内蛋白酶体酶活性的检测2检测相关蛋白变化情况Westernblotting实验结果（一）研究铜（II）-2-巯基苯并噻唑混合物对稳定转染的GFPu-HEK293细胞的蛋白酶体的抑制作用选用稳定转染过GFPu的HEK293细胞为研究对象进行处理，将蛋白酶体抑制剂MG1322.5(μM)作为阳性对照,MT单独作用于细胞的浓度分别为30、60、90（μM）,CuCl2单独作用于细胞的浓度为15、30、45（μM）以及MT和CuCl2以2:1的比例作用于细胞

7、12小时后：（1）荧光显微镜活细胞动态观察拍照：结果显示MG132阳性对照组可看到绿色荧光，MT和CuCl2以2:1比例作用后可看到绿色荧光逐渐增多，呈浓度依赖性；并且形态学死亡加重呈浓度依赖性。（2）收集细胞，裂解细胞抽提总蛋白进行Westernblot蛋白测定。结果显示：反应UPS系统功能的内源性蛋白Ub,外源性蛋白GFPu在MT和CuCl2以2:1的浓度下开始出现聚集，并且呈现浓度依赖性。（